Familia de reductasas de citocromoP-450 en Trypanosoma cruzi.

PORTAL P., VILLAMIL SF, ALONSO GD, FLAWIA MM, TORRES, HN, PAVETO C.

Huerta Grande, Cordoba, Argentina

Congreso; XXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología.; 2006

Sociedad Argentina de Protozoologia (SAP)

La citocromo P-450 reductasa (CPR) actúa como flavoproteina dadora de equivalentes de reducción requeridos por los sistemas de oxidasas de función mixta.  En el proyecto genoma humano se han identificado 57 genes funcionales de citocromo P450,  involucrados en la detoxificacion de xenobioticos y la síntesis de esteroides entre otras funciones. A pesar de los numerosos genes funcionales para el citocromo  P450, existe un solo gen para la CPR en cada especie. En T.cruzi se ha demostrado bioquimicamente la existencia tanto de citocromo P450 como de su reductasa. Utilizando la información del proyecto genoma de T.cruzi hemos identificado tres secuencias correspondientes a CPR que contienen los dominios FAD, FMN y de unión a NADPH. Dos de ellas fueron clonadas, expresadas y caracterizadas bioquimicamente. Las tres (TcCPR-A ,B y C) se expresan al menos en el estadio de epimastigotes. TcCPR-A y TcCPR-B fueron capaces de reducir in vitro a sustratos alternativos y de participar en procesos de de-aminación y de-etilación dependientes de Citocromo P450 medido en un sistema heterólogo in vitro. Epimastigotes de T cruzi de la cepa  CL Brener fueron transfectados con el plasmido pTREX  conteniendo las secuencias TcCPR-A y TcCPR-B. La transfección fue confirmada por ensayos de Southern blot. TcCPR-A resultaría letal. La sobreexpresion de TcCPR-B, se confirmo por Western blot y aumento de la actividad especifica con respecto a los parásitos WT. La sobre-expresión de TcCPR-B en epimastigotes resulto en una mayor sobrevida con respecto a los parásitos que sobre-expresaban GFP, en presencia de las drogas Nifurtimox (50µM) y Benznidazol (2.5µM), indicando la mayor capacidad de los parásitos transgenicos de metabolizar dichos compuestos.