La proteína quinasa TcVps15 participa en la respuesta al estrés nutricional mediada por autofagia en Trypanosoma cruzi

SCHOIJET A.; FLAWIÁ M; ALONSO G.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XXV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2012

LA PROTEINA QUINASA TCVPS15 PARTICIPA EN LA RESPUESTA AL ESTRÉS NUTRICIONAL MEDIADA POR AUTOFAGIA EN TRYPANOSOMA CRUZIAlejandra C Schoijet, Mirtha M Flawiá, Guillermo D Alonso. INGEBI.E-mail: aschoijet@gmail.comEl fosfatidilinositol 3-fosfato (PI-3P) es un importante segundo mensajero para varias vías de tráfico celular. Anteriormente, hemos caracterizado funcionalmente la primera PI3K de clase III en Trypanosoma cruzi, TcVps34, la cual posee un rol en procesos vitales como osmorregulación, acidificación y endocitosis mediada por receptor. En otros organismos, se ha demostrado que Vps34 ejerce su actividad quinasa de lípidos mediante la formación de un complejo con la proteína quinasa Ser-Thr Vps15. En este trabajo, caracterizamos bioquímicamente la quinasa reguladora TcVps15 en T. cruzi, la cual participa en autofagia. El análisis de los parámetros cinéticos de TcVps15 recombinante indicó que es una quinasa catalíticamente activa, con un valor de Km en el rango nanomolar (entre 1,5 y 3 nM) para la proteína básica de mielina (MBP). TcVps15 recombinante mostró una mayor actividad en presencia de Mn2 + que de Mg2 +, no fue activada por Ca+2 y su actividad fue bloqueada por EDTA. Además, parásitos transgénicos que sobreexpresan TcVps15 mostraron un aumento en su actividad quinasa en comparación con células control. Mediante Western blot de parásitos que sobreexpresan TcVps34 o TcVps15, se observó que ambas enzimas se localizan principalmente en la fracción de membrana. En cuanto al rol funcional de TcVps15, estudios de inmunofluorescencia demostraron que bajo condiciones de hambreado TcVps15 colocaliza con Atg8, una proteína que se ha demostrado que localiza en autofagosomas en T. cruzi. Por último, mediante citometría de flujo con naranja de acridina, el cual se acumula en compartimientos ácidos y por lo tanto, es indicativo de la actividad lisosomal que está asociado con la autofagia, se observó un mayor nivel de acidificación en parásitos transgénicos para TcVps15 bajo estrés nutricional en comparación con los controles. En conjunto, nuestros resultados revelan una función previamente desconocida de TcVps15 como un regulador positivo de la autofagia en T. cruzi.