INGEBI   02650
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN INGENIERIA GENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR "DR. HECTOR N TORRES"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Poli(ADP-ribosilación) en tripanosmátidos. Una respuesta a daños en el ADN.
Autor/es:
BALTANÁS RODRIGO; ALONSO GUILLERMO D; TORRES HÉCTOR N; FLAWIÁ MIRTHA M; FERNÁNDEZ VILLAMIL SILVIA H
Lugar:
Huerta Grande, Córdoba, Argentina.
Reunión:
Congreso; XXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología.; 2006
Resumen:
La poli(ADP-ribosa)polimerasa (PARP) es una enzima nuclear que cataliza la transferencia de unidades de ADP-ribosa desde el NAD+ a proteínas. Las cadenas de homopolímeros ramificadas pueden alcanzar hasta 200-300 residuos, con una ramificación cada 20-50 unidades de ADP-ribosa. Estos polímeros son degradados por las enzimas poli(ADP-ribosa)glicohidrolasa (PARG) y ADP-ribosil protein liasa. Generalmente, PARP actúa sobre proteínas de unión a ADN, pero la proteína más comúnmente poli(ADP-ribosilada) es la misma PARP. Utilizando la información derivada de los proyectos genoma de T.cruzi y T.brucei, se identificaron y clonaron secuencias nucleotídicas que presentan homología con genes correspondientes a la PARP de otros organismos. Además, se identificó en T.cruzi una secuencia nucleotídica homóloga a PARG. El análisis in silico de TcPARP y TbPARP indicó que las mismas serían PARPs de tipo 2, ya que poseen una alta identidad en los dominios ya reportados para éstas enzimas: WGR, regulatorio y catalítico. A su vez, TcPARP y TbPARP poseen un dominio amino terminal rico en aminoácidos básicos capaz de unirse al ADN. TcPARP es capaz de automodificarse regulando negativamente su actividad catalítica. En ensayos in vitro, la proteína recombinante TcPARP-His6X fue activada en presencia de ADN dañado de manera dependiente de la concentración. Estos datos, fueron confirmados mediante ensayos de inmunofluorescencia, en los cuales se observo una localización nuclear y se demostró utilizando anticuerpos anti polímero de ADP-ribosa, que la enzima se activa rápidamente cuando los parásitos son incubados en presencia de agentes que dañan el ADN (H2O2 3mM durante 10 minutos). Estos resultados sugieren fuertemente un rol fisiológico de PARP de Trypanosoma cruzi en la reparación del ADN dañado.