Desarrollo de una estrategia de ¨cell display¨ de la fosfotriesterasa de B. diminuta para su uso en la degradación de pesticidas organofosforados

J. BERTANA; E. LEWKOWICZ; A. IRIBARREN; E. GARCIA JUNCEDA

La Plata

Congreso; 5 ENREBB; 2012

Los pesticidas artificiales organofosforados (OPs) son de los productos químicos más comunmente utilizados en la agricultura a nivel mundial para controlar las plagas de insectos. Se caracterizan por ser altamente tóxicos en el hombre y animales. Su toxicidad se atribuye a su capacidad de interaccionar con la acetilcolinesterasa generando hiperactividad nerviosa que finaliza con la muerte del individuo. Los procedimientos biológicos para la eliminación de los OPs del medio ambiente han despertado un interés creciente en los últimos diez años. La enzima que degrada dichos compuestos fue denominada fosfotriesterasa (PTE) y se identificó por primera vez en Brevundimonas diminuta y Flavobacterium sp. [1]. PTE es un homodímero de 72 kDa asociado a la membrana plasmática interna. Los altos costos de purificación de la enzima y la disminución de su estabilidad una vez purificada limitan su aplicación práctica a gran escala. Como una alternativa económica, se pueden utilizar células enteras. Sin embargo, este método presenta como desventaja que el compuesto OP debe difundir a través de la membrana externa para llegar hasta la enzima. Para superar esta limitación y aumentar la tasa de detoxificación, se propone utilizar un motivo de anclaje a la membrana plasmática externa de las células y así, direccionar la enzima a la superficie celular. En el presente trabajo, se describe el diseño y desarrollo de un sistema de anclaje derivado de la proteína INAV de Pseudomonas syringae [2] para direccionar la PTE de B. diminuta a la membrana externa de Escherichia coli. Para ello se clonó el extremo N- y C-terminal del gen inaV fusionado al gen opd (organophosphate-degrading). Dicha construcción, clonada en el vector pET28b(+) se sobreexpresó en células E. coli BL21. Agradecimientos. Este trabajo ha sido financiado por la Comunidad Autónoma de Madrid (S2009/PPQ-1752) y por la Universidad Nacional de Quilmes. Julieta Bertana Lahourcade ha recibido financiación de la Fundación Boehringer Ingelheim. Nestlé Research Center aportó el plásmido pDP245. Bibliografía 1. Harper, L.; McDaniel, S.; Miller, C.; Wild, J. Appl. Environ. Microbiol 1988, 54, 2586-2589. 2. Shimazu, M.; Mulchandani, A.; Chen, W. Biotechnol 2001, 17, 76-80.