INGEBI   02650
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN INGENIERIA GENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR "DR. HECTOR N TORRES"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Puesta a punto de la transformación del genoma plastídico de Solanum tuberosum
Autor/es:
MARÍA EUGENIA SEGRETIN, SONIA WIRTH, FERNANDO BRAVO-ALMONACID
Lugar:
Chascomús, Pcia. Bs As, República Argentina.
Reunión:
Congreso; XXVI Reunión Nacional de Fisiología Vegetal (Asociación Argentina de Fisiología Vegetal -SAFV); 2006
Resumen:
Objetivo: poner a punto los parámetros de regeneración, selección y transformación por biobalística del genoma plastídico de Solanum tuberosum, cultivar Spunta. Resultados y conclusiones: Se desarrolló un vector de transformación de cloroplastos (pBSWUTR), cuya funcionalidad se evaluó mediante ensayos de transformación del genoma plastídico de Nicotiana tabacum var. Petit Havana utilizando el gen reportero uidA y el gen hegf (Wirth et al, J Biotechnology 2006). A fin de lograr la transformación de plástidos de S. tuberosum, se ensayaron distintos parámetros: a) elección del explanto a transformar, b) curvas de sensibilidad al agente selector (aadA, otorga resistencia a espectinomicina), c) protocolos de regeneración y d) ensayos de expresión nuclear transitoria para optimizar los parámetros de bombardeo (empleando al gen uidA como reportero). Se emplearon en los ensayos los siguientes explantos: hojas y entrenudos de plantas in vitro de cv. Desireé y Spunta, y discos de minitubérculos de Spunta. En todos los casos, se realizaron curvas de regeneración en presencia de distintas concentraciones del antibiótico espectinomicina. Para todos los explantos evaluados, no se observó regeneración en ninguna de las concentraciones del selector ensayadas (a partir de 50 mg/ml). Como resultado de los ensayos de expresión nuclear transitoria, los parámetros óptimos de bombardeo se establecieron en: A) cv. Spunta: i) hojas: micropartículas (mp.) de oro de 0,6 mm, gap distance (gd.) 3/8”, y distancia a la muestra (dm.) de 6 cm; ii) entrenudos: mp. de oro de 0,6 mm, gd. 1/4”, y dm. de 6 cm; iii) discos de tubérculos: ninguno de los parámetros evaluados resultó en un número significativo de puntos azules. B) cv. Desireé: i) hojas: mp. de oro de 0,6 mm, gd. 1/4”, y dm. de 6 cm; ii) entrenudos: mp. de oro de 0,6 mm, gd. 1/4”, y dm. de 6 cm. Actualmente se están realizando los ensayos de transformación de S. tuberosum con el vector pBSWUTRGus.