Mr X, un ligando de LePRK1 y LePRK2 de polen de Solanum lycopersicum: su purificación y sus efectos en el citoplasma de polen

DIEGO WENGIER, AGUSTINA MAZZELLA, TAMARA SALEM Y JORGE MUSCHIETTI

Chascomus, Provincia de Buenos Aires

Congreso; XXVI Reunión de la Asociación Argentina de Fisiologia Vegetal; 2006

LePRK2 es un receptor quinasa localizado en la membrana plasmática de los granos de polen de tomate. En el polen maduro, forma parte de un complejo de alto peso molecular junto con LePRK1 (otro receptor quinasa de polen) y otras proteínas desconocidas. En este complejo, LePRK2 se encuentra fosforilada. Sin embargo, al tratar con exudados de pistilo, LePRK2 se defosforila específicamente y el complejo de alto peso molecular se desarma. Hemos demostrado que el componente activo proveniente del pistilo responsable de estos dos fenómenos (Mr X), tiene un peso molecular de 3-10 kDa, es termoresistente, parcialmente resistente a actividades proteásicas y a hidrólisis ácida con HCl concentrado. OBJETIVO: a, Diseñar un esquema de purificación de Mr X e iniciar análisis para determinar la estructura molecular. b, Estudiar los efectos que éste induce en el citoplasma de polen. RESULTADOS: a, Luego de extracciones con solventes orgánicos y separaciones cromatográficas, se obtuvo un único pico que coeluye con la actividad específica de defosforilación de LePRK2. Mr X posee un peso molecular 3550 Da. b, Extractos proteicos de polen de tomate fueron incubados con muestras parcialmente purificadas de Mr X y luego separados en geles bidimensionales. Algunos spots diferenciales fueron determinados por UV-MALDI-TOF. Dos de estas proteínas corresponden a Calreticulina y Luminal Binding Protein. CONCLUSIONES: Estudios adicionales son necesarios para determinar la estructura molecular de Mr X. Ensayos complementarios permitirán la validación de los datos obtenidos por el análisis del proteoma de polen de tomate en respuesta a Mr X. Los resultados obtenidos permitirán una mayor comprensión de este sistema de transducción de señales y su implicancia en la polinización.