Desarrollo de un amplicón inducible.

BEY P., MENTABERRY A. AND ZELADA A.

Chascomús, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XXVI Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2006

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

El uso de plantas como biorreactores para la producción de proteínas recombinantes (“molecular farming”) ha sido implementado exitosamente para muchas proteínas y en varios casos se ha llegado a la escala comercial. Es posible diseñar sistemas de expresión en plantas basados en la integración de amplicones virales al genoma nuclear. Este tipo de sistemas permite combinar el alto nivel de expresión asociado a la amplificación viral con la fidelidad transcripcional propia de la expresión nuclear. En el caso del Potato virus X de la papa (PVX), los intentos de integrar su genoma completo han resultado en el desencadenamiento de fuertes respuestas de silenciamiento génico post-transcripcional (PTGS). Este mecanismo promueve la degradación secuencia-específica de ARN en el citoplasma celular, y se observa frecuentemente ante la sobre-expresión de un transgén o ante la amplificación viral. Este trabajo presenta una alternativa original que tiene como objetivo evitar el gatillado del PTGS. Se desarrolló un amplicón viral basado en el genoma de PVX bajo un promotor inducible por estradiol. Se obtuvieron 20 líneas transgénicas de tabaco para dicha construcción. Se analizó la expresión de proteínas virales por Western blot en las líneas transgénicas detectándose altas cantidades de cápside viral. Se observaron síntomas de infección viral en todas las plantas al ser rusticadas, aún en ausencia del agente inductor. Si bien el sistema de expresión aquí descripto escapa al control del promotor inducible, abre la posibilidad de expresar altos niveles de proteínas a partir de nuestro amplicón basado en PVX, sin desencadenar PTGS.