La mutación de la Thr 215 afecta la funcionalidad de la proteína TGBp1del virus X de la papa

M. BINAGHI; N. MÓDENA, F. CONTE; A.N. MENTABERRY Y A.M. ZELADA.

Chascomús, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XXVI Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2006

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

El genoma de PVX (familia potexvirus) codifica una replicasa viral, tres proteínas de movimiento (MPs: TGBp1, TGBp2 y TGBp3) y la proteína de la cápside (CP). El rol principal de TGBp1 es asistir la movilización viral, conjuntamente con CP y el resto de las MPs. Sin embargo TGBp1 es un proteína multifuncional con actividad helicasa, supresora del silenciamiento génico post-transcripcional (PTGS) y capacidad para modificar el tamaño del plasmodesmo. Diferentes líneas de investigación sugieren que la fosforilación de las proteínas virales podría regular el proceso de movilización. En nuestro laboratorio hemos demostrado que la proteína TGBp1 es fosforilada in vitro e in situ por una quinasa celular con característica de caseína quinasa 2 (CK2). Esta quinasa se halla presente tanto en extractos de plantas de tabaco infectadas con PVX, como en extractos de plantas no infectadas. Además hemos establecido que la fosforilación ocurre en residuos serina y treonina. La comparación de secuencias de las TGBps de distintos potexvirus nos permitió identificar aminoácidos altamente conservados, como la treonina (Thr) 215, a pesar la baja identidad entre las secuencias (. Para determinar si esta Thr es fosforilada y cual es el efecto de esta modificación sobre la funcionalidad de TGBp1, se construyó por mutagénesis dirigida una versión de la proteína recombinante donde se reemplazó la Thr 215 por un residuo alanina (no fosforilable). Los ensayos de fosforilación in vitro mostraron que existe una disminución de aproximadamente un 70% en los niveles de fosforilación respecto de la proteína salvaje. Además generamos construcciones para evaluar la capacidad supresora del PTGS y la movilizacion viral de un amplicón mutante. Observamos que al modificar este residuo se compromete tanto la capacidad de la proteína de suprimir el PTGS, como la capacidad del amplicón mutante de generar infecciones sistémicas con la misma eficiencia que el amplicón salvaje.