INGEBI   02650
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN INGENIERIA GENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR "DR. HECTOR N TORRES"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de epitopes del MHC clase I de la proteína TB10.4 de Mycobacterium tuberculosis en el vector viral Potato virus X
Autor/es:
GONZÁLEZ, P.A., PUCCIO, F.D., BINAGHI, M., MENTABERRY, A. N., ZELADA, A.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
En los últimos años se han multiplicado en el mundo, y particularmente en nuestro país, los casos de tuberculosis con múltiples resistencias a antibióticos, aumentando así los riesgos asociados a la enfermedad. La actual vacuna contra la tuberculosis ha perdido hasta el 80% de su eficacia desde su primera aplicación en humanos en 1927. El desarrollo de estrategias alternativas capaces de satisfacer una enorme demanda es considerada una de las principales opciones en la lucha contra la TB. Una vacuna que actúe de forma eficaz requiere la activación de la vía de respuesta inmune celular (Th1), tradicionalmente mucho más difícil de estimular que su contraparte humoral (Th2). El uso de partículas virales como presentadoras de antígenos ha tenido gran éxito en generar este perfil incluso sin el uso de adjuvantes, de una manera en que las vacunas basadas en proteínas recombinantes tradicionales no logran por sí mismas. El objetivo del presente trabajo es la obtención de viriones recombinantes de Potato virus X (PVX) que expresen epitopes de la proteína TB10.4 de M.tuberculosis fusionados en en el extremo aminoterminal de la cápside viral. Con este fin se eligieron los epitopes TB10.43-11 y TB10.420-28 debido a su alta afinidad por el complejo mayor de histocompatibilidad de Clase I (MHCI), según lo obtenido por el análisis in silico de la proteína TB10.4 utilizando la herramienta RANKPEP. Los epitopes fueron clonados en un vector que contiene el genoma completo del virus PVX cuya expresión es regulada por el promotor 35S del Cauliflower mosac virus (CaMV).  La expresión de los viriones recombinantes PVXTB10.43-11 y PVXTB10.420-28 fue evaluada por agroinfiltración de plantas de Nicotiana bethamiana y  posterior detección de la proteína de fusión por Western blot. Para la obtención de anticuerpos anti TB10.4 se clonó la proteína TB10.4 en un vector de expresión bacteriano, la misma fue expresada en E.coli y la proteína recombinante purificada y utilizada para generar anticuerpos específicos por inoculación en ratones.  La estabilidad genética fue evaluada a diferentes tiempos post infección utilizando RT-PCR y secuenciación de los productos de amplificados utilizando oligonucleótidos adyacentes a la región de inserción. Los viriones recombinantes PVXTB10.43-11 y PVXTB10.420 presentaron altos niveles de expresión de las proteínas fusionadas según lo observado por ensayos de Western blot con anticuerpos anti-CP. Estos viriones fueron capaces de establecer infecciones sistémicas y presentaron estabilidad genética hasta 30 días post-infección según la confirmación por RT-PCR de la presencia de las secuencias que codifican los epitopes en el genoma viral. Por otra parte,  los anticuerpos anti TB10.4 permitieron confirmar por Western blot  la presencia de los epitopes en los viriones PVXTB10.43-11y PVXTB10.420-28. Los resultados obtenidos demuestran que el amplicón PVX es un sistema eficiente para producción de viriones recombinantes que expresen los epitopes TB10.43-11 y TB10.420 en su superficie.