- CDPK3 FOSFORILA AL FACTOR DE TRANSCRIPCION NtRSG (REPRESSION OF SHOOT GROWTH) in vitro.:

GRANDELLIS CAROLINA; BIALER MAGALÍ; RITA M. ULLOA

La Plata

Congreso; RAFV 2010; 2010

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

Solanum tuberosum CDPK3 FOSFORILA AL FACTOR DE TRANSCRIPCION NtRSG (REPRESSION OF SHOOT GROWTH) in vitro   Grandellis, C; Bialer, M; Ulloa RM. e-mail: grandellis@dna.uba.ar INGEBI, Vuelta de Obligado 2490 CABA   Las Proteínas Quinasas Dependientes de Calcio (CDPKs) son moléculas de señalización involucradas en una gran variedad de procesos celulares como metabolismo, desarrollo y respuesta a estrés. Poseen un extremo N-terminal variable (NTV) siendo el dominio menos conservado entre isoformas. Si bien los mecanismos moleculares que permiten discriminar entre sustratos no están completamente dilucidados, recientemente se demostró que el dominio NTV es esencial para el reconocimiento del sustrato (Ito T, 2010). Se ha reportado que NtCDPK1 fosforila al factor de transcripción NtRSG (REPRESSION OF SHOOT GROWTH) regulándolo negativamente (Ishida, 2008). Dicho factor está involucrado en el metabolismo de GAs. En Solanum tuberosum se identificaron 5 isoformas de CDPKs hasta el momento, siendo StCDPK3  97% homóloga a NtCDPK1.  Basándonos en dicha homología proponemos que StRSG podría ser un sustrato de StCDPK3. Resultados: se produjo la proteína recombinante NtRSG-GST y se realizaron ensayos de actividad utilizando ATPγ32, determinándose que 6XHis-StCDPK3 fosforila a NtRSG-GST en presencia de calcio. Además, se hicieron Western Blot utilizando anticuerpos anti-GST, anti-dominio N-terminal de StCDPK3 y anti-His. Proponemos que RSG podría ser un sustrato endógeno de esta isoforma de CDPK. Se amplificó la secuencia codificante completa de StRSG y se fusionó a GST en el vector pGEX6p-1. En el futuro se producirá la proteína recombinante y se ensayara la capacidad de StCDPK3 para fosforilar a StRSG. StCDPK3 fosforila a NtRSG in vitro. Se producirá la proteína recombinante StRSG-GST y se realizarán ensayos de actividad mediada por StCDPK3 para confirmar los resultados previamente obtenidos. Se requerirán además ensayos de interacción in vivo para confirmar la especificidad de reconocimiento del posible sustrato endógeno.