Interacción entre el receptor Mas de angiotensina-(1-7) y el receptor dopaminérgico D2: implicancias en la inflamación

SILVA MG; GRECCO HE; MAZZITELLI L.R.; GIRONACCI MM; RUKAVINA MIKUSIC NL; GOMEZ KA

Congreso; 41 Reunión Anual del Consejo Argentino de Hipertensión Arterial; 2020

El eje depresor del sistema renina-angiotensina (SRA) está representado por la angiotensina (Ang)-(1-7) y el receptor (R) Mas como mediador de los efectos vasodilatadores y anti-inflamatorios de la Ang-(1-7). La dopamina (DA) participa en la regulación de la presión arterial. La activación del R dopaminérgico subtipo 2 (RD2) está implicada en los efectos anti-inflamatorios que ejerce la DA. La evidencia acumulada en los últimos años ha demostrado que la inflamación está involucrada en la patogénesis de la hipertensión arterial. Dado que tanto el RMas como el RD2 pertenecen a la familia de receptores acoplados a proteínas G (RAPG) y que los RAPG heteromerizan con otros R afectando su funcionalidad, planteamos la hipótesis que la acción antiinflamatoria de la Ang-(1-7) y la DA resultaría de la heteromerización RMas-RD2. Nuestro objetivo es investigar la heteromerización RMas-RD2 y sus consecuencias funcionales. Se utilizaron células monocíticas humanas (THP-1) diferenciadas a macrófagos y células de riñón embrionario humano (HEK) 293T. La interacción entre Rs se determinó por co-inmunoprecipitación y por transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET). Los niveles de interleucina (IL) 6 y la fosforilación de ERK1/2 y Akt se determinaron mediante ELISA y Western blot, respectivamente. Ang-(1-7) y el agonista del RD2 sumanirol (SUM) indujeron una disminución en los niveles de IL-6 en macrófagos humanos tratados con un estímulo pro-inflamatorio con lipopolisacárido, la cual fue parcialmente bloqueada por los antagonistas del RD2 y del RMas, respectivamente, sugiriendo la interacción RMas-RD2. La reducción de IL-6 ejercida por SUM fue parcialmente prevenida por un siRNA dirigido contra el RMas, apoyando la interacción RMas-RD2. El ensayo de co-inmunoprecipitación en células THP-1 y HEK293T confirmó la interacción RMas-RD2. El análisis de FRET mostró que los RMas y RD2 interaccionan a través de la formación de un heterómero constitutivo, que no fue modificado por sus agonistas. Ang-(1-7) y DA no cambiaron la fosforilación de Akt o ERK1/2 en las células que expresaron cada R solo. Sin embargo, Ang-(1-7) y DA promovieron la activación de Akt y ERK1/2 en células que expresaron los heterómeros RMas-RD2. El efecto de la Ang-(1-7) sobre la fosforilación de Akt y ERK1/2 fue prevenido por el bloqueo del RD2 mientras que el efecto de la DA fue prevenido por el bloqueo del RMas, apoyando la heteromerización entre RMas-RD2. Nuestros resultados demuestran que los RMas y RD2 interactúan y forman heterómeros constitutivos que no son alterados por sus agonistas. La heteromerización RMas-RD2 está involucrada en la activación de ERK1/2 y Akt inducida por Ang- (1-7) y DA. Además, la interacción RMas-RD2 está implicada en las propiedades anti-inflamatorias que ejercen sus agonistas en macrófagos humanos. Dado que la inflamación está involucrada en la patogénesis de la hipertensión, los compuestos dirigidos al heterómero RMas-RD2 podrían representar una herramienta farmacológica prometedora en el desarrollo de nuevos candidatos a fármacos para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares.