Interacción entre los receptores Mas de angiotensina-(1-7) y el receptor relacionado con el receptor Mas de tipo D, MrgD, de alamandina

MAZZITELLI L; GIRONACCI MM; RUKAVINA MIKUSIC NL; GRECCO, HERNÁN E.; SILVA, MAURO G.; GOMEZ KA

Buenos Aires

Congreso; 40 Reunión Anual del Consejo Argentino de Hipertensión Arterial; 2019

Consejo Argentino de Hipertensión Arterial

Interacciónentre los receptores Mas de angiotensina-(1-7) y el receptor relacionado con elreceptor Mas de tipo D, MrgD, de alamandina SilvaMG, Rukavina Mikusic NL, Mazzitelli L, Gomez KA, Santos RAS, Grecco HE,Gironacci MM. Dpto.Química Biológica, IQUIFIB-CONICET, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA;Dpto. Física, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UBAElsistema renina-angiotensina está compuesto por el eje presor, representado porla angiotensina (Ang) II y el receptor (R) AT1 que media los efectos presores ytróficos de Ang II, y el eje del depresor representado por la Ang- (1-7) y elRMas como mediador de los efectos vasodilatadores, antiinflamatorios yantifibróticos de la Ang-(1-7). La alamandina (ALA), un nuevo componente deeste sistema, ejerce efectos mediados por el receptor relacionado con elreceptor Mas de tipo D (RMrgD) similares a los de la Ang- (1-7). Dado que tantoel RMas como el RMrgD pertenecen a la familia de receptores acoplados aproteínas G (RAPG), y que los RAPG heteromerizan con otros R afectando así sufuncionalidad, planteamos la hipótesis que la acción antiinflamatoria de ambospéptidos resultaría de la heteromerización RMas-RMrgD. Nuestro objetivo esinvestigar la heteromerización RMas-RMrgD y sus consecuencias funcionales. Seutilizaron células monocíticas humanas (THP-1) diferenciadas en macrófagos ycélulas  de riñón embrionario humano(HEK) 293T. La interacción entre ambos Rs se determinó porcoinmunoprecipitación y energía de resonancia de fluorescencia (FRET). Losniveles de interleucina (IL) 6 y la fosforilación de ERK1/2 y Akt sedeterminaron por ELISA y Western-blot, respectivamente.ALA yAng-(1-7) indujeron una disminución en los niveles de IL-6 en los macrófagoshumanos. La disminución en los niveles de IL-6 fue mayor frente a la presenciaconjunta de ambos péptidos, y este efecto fue bloqueado por el antagonista delRMas, lo que sugiere la interacción RMas-RMrgD. La co-inmunoprecipitación deambos Rs en estas células confirmó la interacción RMas-RMrgD.Paraevitar la influencia de otros Rs, se evaluó la interacción RMas-RMrgD y susconsecuencias funcionales en células HEK293T transfectadas con lasconstrucciones que codifican para el gen del RMas y del RMrgD. Investigamos lafosforilación de ERK1/2 y Akt después de la estimulación con su agonista.Ang-(1-7) o ALA no tuvieron efecto sobre la fosforilación de Akt ni de ERK1/2en células que expresaron los RMas o RMrgD solos, respectivamente. Las célulasque co-expresaron los RMas y RMrgD no mostraron cambios en la fosforilación delas kinasas respecto de las células que expresaron solo uno de los receptores.En contraste, tanto la Ang-(1-7) como la ALA promovieron la activación tanto deAkt como de ERK1/2 en las células que expresaron ambos receptores, y esteefecto fue prevenido por el antagonista del RMas. El análisis de FRET mostróque los RMas y RMrgD interaccionan a través de la formación de un heterómeroconstitutivo, que no fue modificado por sus agonistas. La Ang-(1-7) provocó unefecto antiproliferativo en las células HEK293T que expresaron el RMas. La ALAno modificó la proliferación celular en las células que expresaron el RMrgDsolo, sin embargo, indujo una disminución en la proliferación celular en lascélulas que expresaron ambos Rs. Nuestros resultados demuestran la existencia de heteromerizaciónRMas-RMrgD, lo cual proporcionaría una explicación a los efectosantiinflamatorios y antiproliferativos de ALA y Ang-(1-7).