El talio promueve autofagia y quiescencia en células PC12adh

SCHWARZBAUM PJ; VERSTRAETEN SV; SALVATIERRA FRÉCHOU DM

CABA

Congreso; XXI Congreso Argentino de Toxicología; 2019

Asociación Toxicológica Argentina

El talio (Tl) es un metal pesado con dos estados de oxidación, Tl(I) yTl(III), cuyo uso ha generado numerosas intoxicaciones en humanos. Utilizandocélulas de feocromocitoma de rata (línea PC12), como modelo para estudios deneurotoxicidad, demostramos que el Tl induce la muerte por apoptosis. El Tldisminuye aún más la viabilidad de la variante adherente (PC12adh), pero sincausar apoptosis o necrosis. Por esto el objetivo de este trabajo fue estudiarlos mecanismos de citotoxicidad del Tl(I) y Tl(III) en la línea celularPC12adh.La viabilidad remanente al tratamiento con Tl [100 µM] a los distintostiempos de exposición se midió a partir de la exclusión del colorante vitalazul de tripán (AT) (Tabla 1), la reducción mitocondrial del MTT, la adsorcióndel colorante cristal violeta (CV) y la incorporación del colorante rojo neutro(RN) a los lisosomas (Tabla 2). Dado que en la autofagia aumenta el número de lisosomas por célula, larelación RN/[0.5x(MTT+CV)] es un predictor de autofagia (PA), el cual aumentó apartir de las 48 h de exposición al Tl.Además, a las 72 h se observó la presencia de vesículas autofágicas pormicroscopía electrónica, y por Western blot la disminución en la expresión de dosproteínas del autofagosoma que se degradan exclusivamente por autofagia, LC3β yp62/secuestrina. Dado que la exclusión del AT mostró que el Tl frena la proliferacióncelular, se evaluó por inmunofluorescencia la presencia en el núcleo de PCNA(una proteína necesaria para la replicación del ADN), encontrándose éstaexclusivamente en el citoplasma de las células tratadas con Tl. Este cese de laproliferación no se debió a la promoción de senescencia (medido por actividad β-galactosidasa)y pudo ser revertido al reemplazar el medio de ensayo por medio de cultivofresco. Tanto la autofagia como la quiescencia podrían estar mediados por eldaño al ADN provocado por el Tl, el cual se evidenció a partir de las 48 h deexposición por el aumento en la fosforilación de la histona H2AX, proteínareparadora de ADN.Los resultados obtenidos hasta el momento sugieren que en célulasPC12adh el Tl promueve quiescencia celular y autofagia, procesos que resultanen la disminución de la proliferación celular. Proyecto financiado por laUniversidad de Buenos Aires (código 20020170100204BA).