Inducción de vías de muerte y sobrevida luego de la fotoactivación de una ftalocianina catiónica de Zn(II) en células de melanoma

ROGUIN LP; VALLI F; MARINO, V. J; GARCIA VIOR M.C.

San Carlos de Bariloche

Congreso; IV Grafob (IV Reunión de Fotobiológos Moleculares Argentinos); 2018

Grupo Argentino de Fotobiologia, CONICET, Agencia

El melanoma es la forma más agresiva de cáncer de piel, altamente resistente a las terapias convencionales. La terapia fotodinámica (PDT) es una modalidad de tratamiento mínimamente invasiva que combina la utilización de un fotosensibilizador, luz visible y oxígeno molecular, para producir especies reactivas del oxígeno que llevan a la destrucción de los tejidos blanco.Con el objetivo de hallar un fotosensibilizador efectivo para ser utilizado en el tratamiento del melanoma, previamente evaluamos la acción fototóxica de una ftalocianina catiónica de zinc(II) (Pc13) en un panel de células de melanoma. Luego de incubar con Pc13 e irradiar (4,6 J/cm2) se observó una disminución de la viabilidad dependiente de la concentración, con valores de IC50 entre 0.20 ± 0.03 µM y 3.60 ± 0.23 µM, para las células B16F0 y A375, respectivamente. En este trabajo se estudiaron las vías de señalización activadas luego del tratamiento en la línea celular A375 con el propósito de conocer la participación de cada una en mecanismos de sobrevida o muerte celular. Mediante ensayos de Western Blot, se comprobó la fosforilación y activación de AKT y de las MAPK p38, JNK y ERK a tiempos cortos post irradiación (entre 0 y 60 min). Posteriormente, a partir de la utilización de inhibidores farmacológicos de estas vías, se demostró que la viabilidad celular aumentó al bloquear p38, disminuyó cuando se inhibieron AKT y JNK y no se modificó con el inhibidor de la vía de ERK. Estos resultados sugieren que la cascada de señalización mediada por p38 sería responsable, en parte, de la fototoxicidad de Pc13, mientras que AKT y JNK participarían en procesos de sobrevida desencadenados por la PDT.Puesto que la autofagia es un reconocido mecanismo celular producido en respuesta al estrés oxidativo, se evaluó la inducción de este proceso en las células A375 luego del tratamiento fotodinámico. Un aumento en los niveles de LC3II en ensayos de Western Blot, sumado a un incremento en el porcentaje de muerte celular cuando las células fueron preincubadas con inhibidores de autofagia (cloroquina, 3-metiladenina y wortmanina) permitieron confirmar el desencadenamiento de un proceso autofágico, y que el mismo estaría mediando un efecto protector ante el tratamiento fotodinámico. Finalmente, al evaluar el efecto de los inhibidores farmacológicos de cada una de las vías estudiadas sobre los niveles de expresión de LC3II, se pudo determinar que la vía de JNK participa en el incremento de LC3II, contribuyendo a la respuesta autofágica.En conjunto, los resultados obtenidos permitieron establecer el rol de las vías JNK y AKT en procesos de sobrevida y de p38 en mecanismos de muerte celular luego de la irradiación de Pc13 en las células A375. La modulación farmacológica de las vías estudiadas podría ser una alternativa prometedora en el tratamiento clínico del melanoma en el contexto de PDT.