Implantes inyectables de poli(å-caprolactona) diol/polietilenglicol para liberar en forma sostenida hormona de crecimiento (GH)

GONZÁLEZ LORENA; DIEGO CHIAPPETTA; DANIEL TURYN; ALEJANDRO SOSNIK

Costa Salguero, Buenos Aires, Argentina

Jornada; X Jornadas de Farmacia y Bioquímica Industrial; 2009

Sociedad Argentina de Farmacia y Bioquímica Industrial

INTRODUCCIÓN La hormona de crecimiento recombinante es utilizada para el tratamiento de un amplio rango de patologías entre las que se encuentran la deficiencia de GH (GHD) pediátrica, la GHD en el adulto, la insuficiencia renal crónica, el síndrome de Turner y la caquexia secundaria al SIDA. La secreción normal de GH es pulsátil; sin embargo, los regímenes actuales de dosificación de GH no imitan el patrón de secreción normal de GH y aún así son efectivos. La infusión continua de GH es también eficiente para estimular el crecimiento corporal; sin embargo, no están claros los efectos colaterales perjudiciales de la administración continua de GH. Con el fin de establecer los posibles efectos diferenciales de ambas formas de administración de GH sobre el metabolismo y la regulación de vías de señalización implicadas en proliferación y supervivencia celular, el presente trabajo presenta los resultados preliminares obtenidos en el diseño de implantes inyectables para la liberación sostenida de GH para su administración a animales de experimentación. MATERIALES Y MÉTODOS Los implantes inyectables se prepararon solubilizando una mezcla de poli(ε-caprolactona) diol (PCL, PM 5000 Da) y polietilenglicol 3350 en N-metilpirrolidona. Luego, se suspendió la proteína en la solución. La dispersabilidad de la GH utilizada se mejoró solubilizando la proteína en soluciones de PEG (PM 3350) con diferentes relaciones GH:PEG, mezcla que fue luego liofilizada. Las diferentes formulaciones conteniendo GH se inocularon en viales individuales conteniendo 1,5 ml de buffer fosfato isotónico pH 7,4 y se incubaron a 37°C, el medio de liberación fue retirado a distintos tiempos y posteriormente se cuantificó la concentración de proteína liberada por medio del ensayo del ácido bicincónico (BCA). La integridad estructural de la proteína liberada fue analizada por electroforesis en geles de poliacrilamida.ε-caprolactona) diol (PCL, PM 5000 Da) y polietilenglicol 3350 en N-metilpirrolidona. Luego, se suspendió la proteína en la solución. La dispersabilidad de la GH utilizada se mejoró solubilizando la proteína en soluciones de PEG (PM 3350) con diferentes relaciones GH:PEG, mezcla que fue luego liofilizada. Las diferentes formulaciones conteniendo GH se inocularon en viales individuales conteniendo 1,5 ml de buffer fosfato isotónico pH 7,4 y se incubaron a 37°C, el medio de liberación fue retirado a distintos tiempos y posteriormente se cuantificó la concentración de proteína liberada por medio del ensayo del ácido bicincónico (BCA). La integridad estructural de la proteína liberada fue analizada por electroforesis en geles de poliacrilamida. RESULTADOS Los resultados preliminares de liberación de GH in vitro permitieron determinar: La concentración adecuada de poli(ε-caprolactona) para lograr una liberación controlada es de <30%. La liofilización de GH en presencia de PEG permite alcanzar una dispersión más homogénea de la misma en la mezcla precursora y aumentar la cantidad liberada de proteína, siendo la relación GH:PEG 1:1 la más adecuada. La incorporación de PEG mezclado físicamente con PCL aumenta la cantidad de proteína liberada. La hormona de crecimiento es liberada estructuralmente intacta de los implantes en estudio. in vitro permitieron determinar: La concentración adecuada de poli(ε-caprolactona) para lograr una liberación controlada es de <30%. La liofilización de GH en presencia de PEG permite alcanzar una dispersión más homogénea de la misma en la mezcla precursora y aumentar la cantidad liberada de proteína, siendo la relación GH:PEG 1:1 la más adecuada. La incorporación de PEG mezclado físicamente con PCL aumenta la cantidad de proteína liberada. La hormona de crecimiento es liberada estructuralmente intacta de los implantes en estudio. CONCLUSIONES La mezcla de poli(ε-caprolactona) diol al 30% y polietilenglicol 3350 al 5% demostró ser eficiente para liberar la hormona de crecimiento en forma continua según ensayos realizados in vitro. Estos estudios servirán de base para analizar la efectividad de las formulaciones diseñadas para su uso in vivo.ε-caprolactona) diol al 30% y polietilenglicol 3350 al 5% demostró ser eficiente para liberar la hormona de crecimiento en forma continua según ensayos realizados in vitro. Estos estudios servirán de base para analizar la efectividad de las formulaciones diseñadas para su uso in vivo.