IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
95) María Florencia Leal Denis, Natalia Lauri, Venerus Arbilla S, Gross LZF, Cora L. Álvarez, Pablo J. Schwarzbaum
Autor/es:
MARÍA FLORENCIA LEAL DENIS, NATALIA LAURI, VENERUS ARBILLA S, GROSS LZF, CORA L. ÁLVAREZ, PABLO J. SCHWARZBAUM
Reunión:
Congreso; Reunión Anual Safis. 5-7/10/16. Octubre 5-7, 2016; 2016
Resumen:
La á-hemolisina (HlyA) es una toxina extracelular secretada por cepas uropatogénicas de Escherichia coli. Estascepas pueden secretar al lumen vascular HlyA libre o asociada a vesículas llamadas OMVs (outer membranevesicles). Ambas formas pueden interactuar con la membrana plasmática de eritrocitos humanos (h-RBCs),induciendo cambios metabólicos poco conocidos. Estudiamos si HlyA asociada a OMVs (OMVs-HlyA) es capaz deactivar la salida de ATP de h-RBCs, provocando cambios temporales en la acumulación de ATP extracelular(cinética de ATPe). Se aislaron OMVs-HlyA a partir una cepa de E. coli WAM1824. Los h-RBCs (2 108 células) fueronexpuestos a concentraciones variables de OMVs-HlyA por 5 y 10 min a 37°C. Cambios en la [ATPe] fuerondeterminados por una reacción luminiscente (luciferina-luciferasa). Los resultados muestran que OMV-HlyA indujosalida de ATP y hemólisis de distinta magnitud, dependiendo de la concentración de OMVs y del tiempo de74exposición. Con 5 ng prot/ìl de OMV-HlyA, la [ATPe] se incrementó de 383 ± 54 (5 min) a 1117 ± 533 nM (10 min),mientras que el % de hemólisis fue de 0.1% y 0.8%, respectivamente; indicando que éste incremento correspondiómayormente a salida no lítica de ATP. Con 10 ng prot/ìl de OMV-HlyA, la hemólisis se incrementó de 9.4% (5 min) a42.2% (10 min), lo que llevaría a un incremento de la [ATPe] por salida lítica de ATP. Sin embargo, la [ATPe]disminuyó de 40 ± 7 μM (5 min) a 4 ± 2 μM (10 min). Este resultado podría deberse a un incremento en la hidrólisisde ATPe por ATPasas intracelulares liberadas por hemólisis. En efecto, al determinar la velocidad de hidrólisis deATPe de hemolisados de h-RBCs, observamos que la actividad ATPasica fue una función lineal del número decélulas lisadas, con actividad ATPasica a 600nM ATP de 6 nM/(min 106células lisadas). Es decir, que el aumentoobservado en el grado de hemólisis (5 min vs 10 min de exposición) permitiría explicar la disminución de la [ATPe]con el tiempo de incubación, considerando que la actividad ATPasica de las OMVs es despreciable en estascondiciones. En resumen OMVs-HlyA induce salida de ATP, tanto lítica como no lítica. A mayor concentración deOMVs-HlyA se esperaba observar una mayor [ATPe], pero por el contrario ésta disminuye debido a la actividad deATPasas intracelulares liberadas al medio por hemólisis.Con subsidios UBACYT (20020130100027BA), PICT 2014-0327, CONICET (PIP 20110100639 Y11220150100459) y ECOS Sud (Francia)-MINCYT(Argentina) A15S01, PDTS-CIN 193.