Acción fototóxica de una formulación micelar conteniendo una ftalocianina de Zinc(II) lipofílica en cultivos bi y tridimensionales.

NICOLÁS A. CHIARANTE; GARCÍA VIOR M. CECILIA; OSVALDO REY; LEONOR P. ROGUIN; JULIETA MARINO; JOSEFINA AWRUCH

Buenos Aires

Simposio; Simposio "Ganando la Guerra contra el Cáncer"; 2016

Programa RAICES Red de Científicos Argentinos en el Noreste de EE.UU.

Las ftalocianinas (Pc) son compuestos fotosensibilizadores de potencial utilidad en terapia fotodinámica. En nuestro laboratorio comprobamos el efecto antiproliferativo de una Pc lipofílica (Pc9, IC50 10 ± 1 nM) incorporada en micelas de poloxamina sobre una línea de células de carcinoma de colon murino (CT26). Con el propósito de investigar el mecanismo de acción de este compuesto, demostramos que luego de irradiar las células con 2.8 J.cm-2 (40 minutos) se produce un incremento significativo en la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS). Mediante ensayos de citometría de flujo observamos que la máxima captación de Pc9 se alcanza luego de 4 h de incubación. El empleo de sondas fluorescentes organelo-específicas nos permitió determinar que Pc9 se localiza principalmente en lisosomas y retículo endoplásmico. La participación de ambas organelas en la respuesta biológica activada por Pc9 fue examinada por ensayos de Western blot (WB). Comprobamos que el tratamiento con Pc9 favorece la liberación al citosol de la enzima lisosomal catepsina D y modifica los niveles de expresión de proteínas de estrés del retículo endoplásmico (Bip, Hsp70 y Hsp110). También detectamos un aumento en la proporción de células con la membrana mitocondrial despolarizada utilizando la sonda fluorescente DiOC6. Asimismo, observamos una disminución en los niveles de expresión de procaspasa 3 por WB y la presencia de núcleos picnóticos teñidos con Höechst 33258 mediante microscopía de fluorescencia.El efecto antiproliferativo de Pc9 fue además puesto en evidencia en cultivos tridimensionales (esferoides) de células CT26, en los cuales observamos una diferencia significativa del volumen de esferoides tratados vs controles en función del tiempo de incubación post-irradiación.En conclusión, demostramos que Pc9 es un agente fototóxico efectivo en cultivos bi y tridimensionales, que favorece la producción de ROS e induce la permeabilización de la membrana lisosomal, la activación de una respuesta de estrés del retículo endoplásmico y muerte celular por apoptosis.