IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Prohibitina-1: un novedoso ligando de galectina-1
Autor/es:
BACIGALUPO, MARÍA L.; CARABIAS, PABLO; MANZI, MALENA; ESPELT, MARÍA V.; ELOLA, MARÍA TERESA; RABINOVICH, GABRIEL A.; WOLFENSTEIN-TODEL, CARLOTA; TRONCOSO, MARIA F.
Lugar:
MAR DEL PLATA
Reunión:
Congreso; LX Reunión de la Sociedad de Investigación Clínica; 2015
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
Galectina-1 (Gal1) es una proteína capaz de unir glicanos a través de su dominio de reconocimiento a carbohidratos (CRD). Gal1 se encuentra sobre-expresada en el carcinoma hepatocelular (HCC) y sus niveles de expresión se asocian con una mayor invasión tumoral, metástasis, y menor sobrevida de los pacientes. Nuestro grupo describió que células de HCC humano que sobre-expresan Gal1 promueven el crecimiento tumoral y metástasis en ratones nude. Además el incremento de Gal1 en células de HCC induce la transición epitelio-mesénquima, evento clave en la diseminación de las células tumorales. Si bien se han descripto varios ligandos de Gal1 en diversos tejidos, no se ha descripto ninguno en el tejido hepático. El objetivo de este trabajo fue identificar los ligandos de Gal1 a partir de hepatocitos tumorales, utilizando herramientas de proteómica. Primero, expresamos Gal1 recombinante de origen humano (rGal1) en un sistema heterólogo y la purificamos mediante cromatografía de afinidad en una columna de lactosa-agarosa, aprovechando la adsorción de rGal1 a través de su CRD. Luego, obtuvimos lisados de células de HCC humano HepG2 y HuH-7 los cuales se sometieron a una cromatografía de afinidad en una columna de rGal1 acoplada a una matriz Affi-gel 15. Las proteínas adsorbidas se eluyeron con lactosa y se sometieron a SDS-PAGE y digestión proteolítica con tripsina in gel. Los péptidos resultantes se analizaron por espectrometría de masa. El estudio de los espectros de fragmentación permitió identificar a prohibitina-1 (PHB1) como un novedoso ligando de Gal1, con un porcentaje de cobertura del 12 %. Confirmamos la expresión de PHB1 en las células de HCC HepG2 y HuH-7 mediante Western blot e inmunofluorescencia. PHB1 es una proteína que modula el crecimiento tumoral, la resistencia a la quimioterapia y la metástasis, a través de diversos mecanismos. Hasta el momento, esta proteína no había sido descripta como ligando de ningún miembro de la familia de las galectinas.