Receptor Mas a nivel neuronal: ¿tráfico diferencial implicado en la hipertensión arterial en SHR?

CERNIELLO FM, GIRONACCI MM

Buenos Aires

Congreso; 41º Congreso Argentino de Cardiología; 2015

El tráfico de receptores acoplados a proteína G (RAPG) cumple una función crítica en la regulación de la señalización inducida por el estímulo de receptor (R). Alteraciones en el tráfico de RAPG se han asociado con diversas patologías. Hemos demostrado que el RMas es internalizado luego de ser estimulado con angiotensina (Ang) (1-7) y direccionado a endosomas tempranos. Nuestro objetivo fue investigar el tráfico del RMas en condiciones fisiológicas y en la hipertensión arterial. Para ello se utilizaron células HEK293T transfectadas con un vector que contiene la secuencia que codifica para RMas fusionado a la proteína fluorescente amarilla (HEK293T-RMas-YFP) y neuronas de tallo cerebral de ratas normotensas Wistar-Kyoto (WKY) y espontáneamente hipertensas (SHR). Para evaluar las vías involucradas en la internalización del RMas, medimos la fracción del R internalizada en presencia de dominantes negativas de las vías de caveolina y de clatrina en HEK293T-RMas-YFP estimuladas con Ang-(1-7), midiendo la unión de 125I-Ang-(1-7) al RMas remanente en la membrana y el tráfico del R se evaluó por colocalización con marcadores específicos. El RMas no se internalizó por estímulo con su ligando en presencia de dominantes negativas para las vías de clatrina y caveolina, demostrando que estas dos vías son responsables de la internalización del RMas. El RMas-YFP colocalizó con Rab11, marcador de vesículas de reciclado lento a la membrana, pero no con Rab4, marcador de vesículas de reciclado rápido a la membrana, o Lamp1, marcador de lisosomas, lo que desmuestra que el RMas es internalizado y reciclado lentamente a la membrana plasmática sin ser direccionado a lisosomas. Similar resultado se observó en neuronas de tallo de ratas WKY y SHR: el R luego de la estimulación con su ligando es internalizado, direccionado a endosomas tempranos y reciclado a la membrana plasmática. Sin embargo la fracción de R internalizado fue mayor en las neuronas de SHR con respecto a WKY. Sorprendentemente, cuando evaluamos la colocalización del R Mas con un marcador nuclear observamos que las neuronas de SHR presentaron un aumento en el contenido del RMas en el núcleo luego de ser estimuladas con Ang-(1-7), no así en las neuronas de WKY. Nuestros resultados muestran que el RMas luego de un estímulo con Ang-(1-7) es internalizado por una vía dependiente de clatrina y caveolas siendo luego reciclado a la membrana plasmática. En la hipertensión arterial se observa un tráfico diferencial del R: mayor internalización del RMas, menor reciclado a la membrana plasmática y direccionamiento al núcleo celular. Este tráfico diferencial del RMas podría contribuir al desarrollo y persistencia de hipertensión arterial.