Regulación dinamica de de ATP extracelular en Escherichia coli

ALVAREZ CL, LAURI N, CORRADI G, DUARTE E, SACERDOTE M, NIEVEZ L, ESPELT MV, LEAL DENIS MF, HERLAX V, SCHWARZBAUM PJ

Congreso; Reunion anual SAFIS-SAIC; 2015

SAFIS-SAIC

E. coli es el principal anaerobio facultativo del sistema digestivo. Deacuerdo al contexto fisiológico del huésped, este organismo puedecaptar ATP exógeno, siendo metabolizado por nucleotidasas en elperiplasma, o liberar ATP del periplasma al medio extracelular. In vitrola regulación de ATP extracelular (ATPe) de E. coli depende delbalance entre la liberación de ATP y la hidrólisis de ATPe pornucleotidasas. Se estudió la regulación de ATP extracelular (ATPe) desuspensiones de E. coli DH5α (2x109 cél/ml) a 20 °C. Hidrólisis deATPe: se evaluó en suspensiones mediante la liberación de [32P]Pi apartir de [γ 32P]ATP. En medios con fosfato (M9), a 100-1000 nM ATP,la acumulación de Pi fue lineal en el tiempo y la actividad ATPasica(vi) fue proporcional a la [ATPe]. A 600 nM y 500 μM ATPe vi fue 2,77-19,26 veces superior en un medio sin fosfato (hepes) que en M9. Enambos medios a 600 nM vi fue inhibida 28 % por suramina y 71 % porel análogo de ATP (AMP-CPP). Liberación de ATP: se evaluó ensuspensiones mediante la cuantificación de la [ATPe] porluminiscencia. En ausencia de estimulo, la [ATPe] fue 202 ± nM/108cels. La exposición a 10 μM del péptido mastoparan 7 no afectó laviabilidad, e indujo un aumento de 414 veces en la liberación de ATP,alcanzándose una [ATPe] de 1010 ± nM/108 cels (n= 13). Laincubación con el péptido melitina produjo liberación de ATPdependiente de la dosis, tanto en ausencia como en presencia de lisis.En conclusión, en suspensiones bacterianas, y en ausencia de lisis,se verificó: - actividad ATPasica en un amplio rango deconcentraciones. En medios sin fosfato, vi fue mayor. Esto escompatible con la existencia de dos nucleotidasas, una de las cualeses inhibida por fosfato. - liberación de ATP. Con mastoparan 7 estaliberación es 400 veces superior a la actividad ATPasica. Por lo tanto,la evolución temporal de acumulación de ATPe refleja el perfil cinéticode liberación de ATP. Con subsidios UBACYT (20020100100090),CONICET (PIP 639).