DERIVADOS DE BENZIMIDAZOL INHIBIDORES DE LA ENTRADA DEL VIRUS DE LA DIARREA BOVINA A LA CÉLULA HUÉSPED POR INTERACCION CON LA GLICOPROTEINA DE ENVOLTURA E2

MARÍA JOSE PASCUAL; FERNANDO MERWAISS; EMILSE LEAL; MARIELA BOLLINI; DIEGO E. ALVAREZ

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología y II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología

El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) es un patógeno del ganado vacuno. La infección con BVDV reduce la productividad causando pérdidas económicas para la industria ganadera. La partícula viral comprende una membrana lipídica asociada a dos glicoproteínas de envoltura E1 y E2, que rodean a la nucleocápside que contiene el genoma de RNA del virus. E2 cumple un rol fundamental para la entrada del virus a la célula huésped dado que interacciona con receptores en la superficie de la célula que median la endocitosis de la partícula viral, y es esencial en la fusión de la envoltura del virus con la membrana del endosoma en medio ácido para liberar el genoma de RNA en el citoplasma de la célula infectada. La reciente determinación de su estructura cristalina reveló que E2 no es una proteína de fusión canónica abriendo nuevas perspectivas en el estudio del mecanismo molecular de la entrada de BVDV. El objetivo de este trabajo es usar E2 como blanco de pequeñas moléculas para inhibir la entrada de BVDV y determinar las bases moleculares de su mecanismo de acción. Para este fin se empleó el diseño guiado por computadoras para identificar compuestos líderes que interaccionan con E2 in silico y se realizó luego un screening de actividad antiviral mediante ensayos de reducción del efecto citopático en células en cultivo. Como resultado se identificó un derivado de benzimidazol con actividad antiviral en el rango micromolar que además no presentaba un efecto citotóxico sobre células MDBK. Con el fin de evaluar en qué etapa de la infección (adsorción, entrada ó replicación) actuaba este compuesto se realizaron ensayos de tiempo de adición. Se observó que el número de focos de infección disminuye cuando el compuesto se agrega luego de la adsorción sugiriendo que la inhibición ocurre durante la entrada. Por otra parte se realizó un ensayo de selección de virus resistentes mediante pasajes seriados de BVDV en presencia de concentraciones crecientes del compuesto y se secuenció la región que codifica para E2 con el fin de identificar las mutaciones que confieren resistencia antiviral y determinar el blanco molecular del compuesto. Finalmente, se estudió la interacción directa de este compuesto con E2 usando un ensayo de espectrometría de fluorescencia para medir la unión del compuesto a una versión recombinante de la glicoproteína E2 en solución. Nuestros resultados indican que el derivado de benzimidazol inhibe la entrada de BVDV a la célula huésped a través de la unión a E2 bloqueando presumiblemente el paso de la fusión de la envoltura viral con la membrana endosomal.