Regulación dinámica de ATP extracelular en Escherichia coli

ALVAREZ CORA LILIA; LAURI NATALIA; CORRADI GERARDO; DUARTE ELIANA; SACERDOTI MARIANA; NIEVEZ LUCIANO; ESPEL MARÍA VICTORIA; LEAL DENIS MARÍA FLORENCIA; HERLAX VANESA; SCHWARZBAUM PABLO

Mar del Plata

Congreso; SAIC.SAFIS. LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2015

SAIC.SAFIS

E. coli es el principal anaerobio facultativo del sistema digestivo. De acuerdo al contexto fisiológico del huésped, este organismo puede captar ATP exógeno, siendo metabolizado por nucleotidasas en el periplasma, o liberar ATP del periplasma al medio extracelular. In vitro la regulación de ATP extracelular (ATPe) de E. coli depende del balance entre la liberación de ATP y la hidrólisis de ATPe por nucleotidasas.Se estudió la regulación de ATP extracelular (ATPe) de suspensiones de E. coli DH5α (2x109 cél/ml) a 20 °C.Hidrólisis de ATPe: se evaluó en suspensiones mediante la liberación de [32P]Pi a partir de [γ 32P]ATP. En medios con fosfato (M9), a 100-1000 nM ATP, la acumulación de Pi fue lineal en el tiempo y la actividad ATPasica (vi) fue proporcional a la [ATPe]. A 600 nM y 500 µM ATPe vi fue 2,77-19,26 veces superior en un medio sin fosfato (hepes) que en M9. En ambos medios a 600 nM vi fue inhibida 28 % por suramina y 71 % por el análogo de ATP (AMP-CPP).Liberación de ATP: se evaluó en suspensiones mediante la cuantificación de la [ATPe] por luminiscencia. En ausencia de estimulo, la [ATPe] fue 202 ± nM/108 cels. La exposición a 10 µM del péptido mastoparan 7 no afectó la viabilidad, e indujo un aumento de 414 veces en la liberación de ATP, alcanzándose una [ATPe] de 1010 ± nM/108 cels (n= 13). La incubación con el péptido melitina produjo liberación de ATP dependiente de la dosis, tanto en ausencia como en presencia de lisis.En conclusión, en suspensiones bacterianas, y en ausencia de lisis, se verificó:- actividad ATPasica en un amplio rango de concentraciones. En medios sin fosfato, Vi fue mayor. Esto es compatible con la existencia de dos nucleotidasas, una de las cuales es inhibida por fosfato.- liberación de ATP. Con mastoparan 7 esta liberación es 400 veces superior a la actividad ATPasica. Por lo tanto, la evolución temporal de acumulación de ATPe refleja el perfil cinético de liberación de ATP.Con subsidios UBACYT (20020100100090), CONICET (PIP 639).