IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Interacción entre el dominio de unión a ATP de la bomba de Ca2+ de membrana plasmática y el ATP
Autor/es:
MAZZITELLI LUCIANA; MONTES GUADALUPE; MONTES MÓNICA RAQUEL; ADAMO HUGO P.
Lugar:
Santiago del Estero
Reunión:
Congreso; Reunión Anual Sociedad Argentina de Biofísica. Año 2015; 2015
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
Interacción entre el dominio de unión a ATP de la bomba de Ca2+ de membrana plasmática y el ATP.1.- Mazzitelli, Luciana R., 2.- Montes, M. Guadalupe, 3.- Montes, Mónica R., 4.- Adamo, Hugo P.La Bomba de Ca2+ de Membrana Plasmática (PMCA) es una ATPasa del tipo P que transporta Ca2+ en contra de su gradiente electroquímico desde el citosol hacia el espacio extracelular concomitantemente con la hidrólisis de ATP. La PMCA es una proteína de aproximadamente 135 kDa con 10 segmentos transmembrana. En este trabajo, hemos sobre-expresado en E. coli, la región correspondientes al loop citoplasmático mayor de la PMCA, Esta región (ATPBD) corresponde a los dominios de unión a ATP y fosforilación de la PMCA y se intercala entre los segmentos transmembrana 4 y 5. La sonda fluorescente eosina Y actúa como inhibidor reversible de la Na+/K+-ATPasa compitiendo por el sitio de unión a ATP1. Utilizando eosina Y se estudió la interacción entre el ATPBD de la PMCA y el ATP. Los resultados obtenidos muestran que:1) La intensidad de fluorescencia de la eosina Y aumentó en presencia de ATPBD y se desplazó hacia mayores longitudes de onda, indicando que el ATPBD interactúa con la eosina Y. El agregado de 3 mM de ATP, reviertió este efecto (desplazando el 60% de la eosina Y). En contraste, el agregado de 3 mM de AMP no produjo cambios en el espectro de emisión de la eosina Y-ATPBD sugiriendo que el efecto es específico del ATP. 2) La afinidad aparente por ATP, en presencia de eosina, disminuyó al disminuir la concentración de eosina sugiriendo que el ATP compite por el sitio de unión de la eosina.En conjunto, estos resultados sugieren que el ATPBD de la PMCA expresado en forma aislada es capaz de unir ATP y podría ser utilizado como herramienta para el estudio de la interacción de la PMCA con este ligando.Referencias 1Skou, J.C. and Esmann M. (1981) Bioch Biophys Acta 1, 101-107.Agradecimientos With grants from ANPCyT , CONICET and UBA. Afiliaciones1,2,3,4 - IQUIFIB-Departamento de Química Biológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA. Junin 956, 1113 Ciudad de Buenos Aires