IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
El Uso de MALDI TOF TOF MS para el Estudio de los Esfingolípidos
Autor/es:
PESCIO LG; LOPEZ VG; FAVALE NO; SANTACREU B; STERIN-SPEZIALE NB
Lugar:
Los Cocos
Reunión:
Congreso; Segundo Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2014
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa
Resumen:
En nuestro laboratorio estudiamos la importancia de los esfingolípidos (SLs) en la diferenciación de las células epiteliales renales. Los SLs presentan gran diversidad estructural y recientemente se le han adjudicado funciones específicas a determinadas especies moleculares. Resultados previos de nuestro laboratorio han demostrado que las células MDCK (un modelo de células tubulares renales) desarrollan fenotipo diferenciado en presencia de hipertonicidad extracelular. El objetivo del presente trabajo fue analizar las especies moleculares de SLs involucradas en el proceso de diferenciación celular utilizando MALDI TOF TOF MS. Para llevar a cabo el estudio, las células MDCK fueron incubadas en condiciones de isotonicidad o de hipertonicidad durante 24h y 48h y los lípidos fueron extraídos y separados por TLC. Las especies moleculares de ceramida (Cer), glucosilceramida (GlcCer) y lactosilceramida (LacCer) fueron analizadas por MALDI TOF-TOF MS. Los estudios se llevaron a cabo en el LANAIS PRO EM y el equipo utilizado fue 4800 MALDI TOF/TOFTM Analyzer (Applied Biosystems) empleando como matriz 2,5-DHB 20 mg/ml en MeOH:TFA (90:0.1 v/v) adicionado con (NH4)2SO4 100mM. Se detectaron picos de los iones [M+H]+, [M+H ? H2O]+ y [M+Na]+ que permitieron la identificación de siete especies moleculares de ceramida y sus correspondientes GlcCer y LacCer (d18:1/C16:0, d18:1/C18:0, d18:1/C20:0, d18:1/C22:0, d18:1/C24:1, d18:1/C24:0 y d18:1/C24:0h). La identidad de cada esfingolípido fue confirmada por MS/MS (se buscaron los picos que rindieran m/z 264: esfingosina ? 2H2O y picos característicos de Cer, GlcCer o LacCer, según corresponda). Posteriormente, se llevó a cabo la cuantificación relativa de las subespecies de Cer, GlcCer y LacCer en las diferentes condiciones experimentales. Para ello se tuvo en cuenta la sumatoria de las alturas de los picos de los iones [M+H]+, [M+H ? H2O]+ y [M+Na]+ de cada especie molecular, dado que los espectros de GlcCer y LacCer presentaron iones [M+Na]+ de mayor intensidad. Los resultados demostraron que las células cultivadas en hipertonicidad presentan un aumento en el porcentaje de C16:0 Cer a las 24h de tratamiento que se reduce a los valores control a las 48h, y un aumento progresivo en el porcentaje de C24 Cer a expensas de una disminución en C18:0 Cer. Respecto de GlcCer, la hipertonicidad indujo un aumento progresivo de los porcentajes de C24:0 y C24:1 GlcCer. En cambio, en las especies de LacCer se observó un aumento en el porcentaje de C16:0 LacCer y una disminución de C22:0 y C24:0 LacCer, luego de 48h de tratamiento. Estos resultados demuestran que el perfil de SLs es modificado durante la progresión hacia la diferenciación de las células MDCK y que esto se puede monitorear mediante el uso de MALDI TOF TOF MS.