Regulación de ATP extracelular de Escherichia coli

81) LAURI N, CL ALVAREZ, S BADORREY, LD NIEVEZ, G CORRADI Y PJ SCHWARZBAUM

Buenos Aires

Congreso; Congreso SAFIS 2014; 2014

Varios tipos celulares y microorganismos liberan ATP de manera no lítica almedio extracelular. La acumulación temporal de ATP extracelular (ATPe)depende del balance dinámico entre liberación de ATP y su hidrólisis extracelularpor medio de ectonucleotidasas. En este trabajo se estudió laregulación de ATPe de Escherichia coli expuestas al péptido mastoparan 7(MST7). Se utilizaron E. coli de la cepa DH5α (2 109 cél/ml). La concentraciónde ATPe fue evaluada por luminiscencia. Se registró de manera continuala intensidad de luz en suspensiones de bacterias con luciferina-luciferasa.La velocidad de hidrólisis de ATPe (actividad ectoATPasa) se evaluóen suspensiones de bacterias mediante la liberación de [γ32P]Pi a partirde [γ 32P]ATPe. Se realizaron mediciones en el rango nM (100-1000 nM) yen condiciones de velocidad máxima (500 μM). En ausencia de estímulo,la [ATPe] se mantuvo constante en el tiempo en 2.03 ± 0.42 nM/106 cél(N=5, n=10). La exposición a 10 μM MST7 produjo un aumento no linealagudo a 5.83 ± 0.66 nM/106 cél (N=5, 5=10), resultando una tasa deliberación de ATP de 0.15 pmol/106 cél/min. La actividad ectoATPasa fue2.6 10-5 pmol/106cél/min a 100 nM ATPe, 4.2 10-4 pmol/106cels/min a 1μM ATPe (N=3, n=6) y 2.17 10-2 pmol/106cels/min a 500 μM ATPe (N=4,n=7). En conclusión, se observa una liberación de ATPe por MST7. Estaliberación es muy baja en relación al contenido de ATPi de E. coli y por lotanto no representa un compromiso energético para la célula. Además, seobserva que la actividad ectoATPasa en el rango nM es baja con respectoa la tasa de liberación de ATP. Esto significa que la regulación de ATPe estádeterminada mayormente por la liberación del nucleótido al medio extracelular.Con subsidios UBACYT (20020100100090), CONICET (PIP1187y PIP 639) y ANPCyT (0151).