Desarrollo de un Nuevo Ensayo para la Detección de la Proteína Frataxina: Implicancias para el Diagnóstico y el Diseño de Ensayos Clínicos para Ataxia de Friedreich (FRDA)

CLAUDIA PERANDONES; GABRIELA RAINA; DANIELA CALVO; MARTÍN RADRIZZANI; MARÍA ELENA GIUNTINI DE JUAREZ; RALPH PIKIELNY; FEDERICO MICHELI; SANTIAGO E. FARAJ; ALEJANDRO FERRARI; JAVIER SANTOS

Mendoza

Congreso; 51° Congreso Argentino de Neurología; 2014

Sociedad Neurológica Argentina

Introducción y objetivos: FRDA es la ataxia hereditaria más común en la población caucásica. El defecto molecular consiste en la expansión patológica del trinucleótido GAA en el primer intrón del gen que codifica la frataxina (FXN). Se han reportado a la fecha, sólo cuatro estudios que han intentado cuantificar los niveles de frataxina. Objetivos: Desarrollar un ensayo para optimizar la detección de frataxina frente a la sospecha de FRDA y como biomarcador de progresión de enfermedad. Material y métodos: Se incluyeron doce pacientes con fenotipo de FRDA clásico (10 homocigotos para la expansión de GAA y 2 con expansión de GAA en heterocigosis y portación de mutaciones puntuales de FXN) y 10 controles sanos. La frataxina se midió con un inmunoensayo enzimático competitivo interno. En contraste con otros análisis, el ensayo desarrollado en nuestro laboratorio utiliza un único suero específico (de conejo), sin anticuerpos de captura adicionales, y constituye una determinación de alta sensibilidad y bajo costo. Los niveles de FXN se determinaron interpolando cada muestra en una curva estándar de cuatro parámetros, mediante el software Graph Pad Prism. Luego los niveles de FXN se normalizaron según su contenido proteico total y se expresaron como fg de FXN/μg de proteínas totales. Resultados: Se hallaron niveles elevados de FXN (3,4-0,9 pg/mg de proteínas totales) en los controles, mientras que los pacientes con FRDA presentaron niveles significativamente menores (0,1-0,2 pg/mg). Cabe destacar que para nuestros datos se utilizó sangre entera como fuente de FXN. Conclusiones: Hemos desarrollado un novedoso ensayo de alta sensibilidad para medir la FXN que permitió diferenciar a pacientes con FRDA de individuos sanos. Proponemos este método como biomarcador en ensayos clínicos y también antes de una secuenciación completa de FXN si el análisis genético revela una expansión heterocigota, los antecedentes familiares no son informativos o los síntomas clínicos no resultan evidentes.