El receptor Mas de angiotensina-(1-7) y el receptor B2 de bradikinina interaccionan formando un hetero-oligómero. Consecuencias funcionales

CERRATO BD, GRECCO H, GIRONACCI MM

Congreso; XXXIV Reunión Anual Científica del Consejo Argentino de Hipertensión Arterial; 2013

Objetivo: La angiotensina-(1-7) (Ang)-(1-7), a través del receptor Mas, y la bradiquinina (BK), a través del receptor B2, ejercen efectos que llevan a una disminución de la presión arterial, oponiéndose y balanceando así el efecto presor característico de la Ang II. Está demostrado, que ambos ligandos, tienen la capacidad de potenciar su efecto biológico al actuar juntos, y además, que cualquiera de ellos pierde su efecto biológico, si el receptor del otro se encuentra knockeado o antagonizado. Estos receptores pertenecen a la familia de receptores acoplados a proteína G (RAPG). Se ha demostrado que los RAPG existen como homo-oligómeros y hetero-oligómeros, modulando su función biológica. La oligomerización de los RAPG regula sus propiedades fisiológicas y farmacológicas, actuando sobre la internalización, transducción de señales, reciclado y degradación de los RAPG. Teniendo en cuenta que existen evidencias fisiológicas que demuestran una fuerte interacción entre la Ang-(1-7) y la BK, nuestro objetivo es investigar si los receptores Mas y B2 que median sus efectos, interaccionan formando un hetero-oligómero, y si ello afecta la funcionalidad de cada uno de los receptores. Métodos: se determinó la formación del hetero-oligómero Mas-B2 por la técnica de Transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) en células de riñón embrionario humano (HEK 293) las que fueron co-transfectadas con las construcciones que expresan el receptor Mas fusionado a la YFP y el receptor B2 fusionado a la CFP (Mas-YFP y B2-CFP respectivamente). 48 h después se evaluó la existencia de interacción entre ambos receptores en forma constitutiva, o bien, si es inducida por los ligandos, así como la funcionalidad del hetero-oligómero formado por ensayos de unión hormona-receptor. Resultados: Las células HEK 293 transfectadas con cada una de las construcciones por separado demostró que las quimeras (Mas-YFP y B2-CFP) se expresan correctamente en la membrana plasmática, que fueron reconocidas por cada uno de los ligandos y su estimulación produjo la activación de transducción de señales, lo cual demuestra la correcta funcionalidad de las mismas. Cuando se realizó FRET en las células HEK 293 transfectadas con ambas construcciones, o sea que expresan ambas quimeras en la misma célula, se observó que existe una interacción constitutiva entre los receptores Mas y B2 en la membrana plasmática. La estimulación con el ligando, Ang-(1-7) o BK, produjo redistribución de la fluorescencia producto de las quimeras Mas-YFP y B2-CFP dentro de vesículas intracelulares. Estas células presentaron FRET positivo. Esto sugiere que el ligando estimula la internalización del hetero-oligómero formado. Por ensayos de unión-receptor observamos que la estimulación con BK por 30 minutos, indujo la internalización del receptor B2 en un 91+4% y un 53+3% de los receptores Mas, mientras que la estimulación con Ang-(1-7) indujo la internalización del receptor Mas en un 82+6% y un 58+4% de los receptores B2. Conclusiones: nuestros resultados demuestran que existe interacción entre los receptores Mas y B2, un hetero-oligómero constitutivo, y que este hetero-oligómero es internalizado por estímulo de cualquiera de sus ligandos, disminuyendo así, no solo los receptores en membrana del receptor correspondiente del ligando, sino también, del otro receptor