CAMBIO CONFORMACIONAL Y AGREGACIÓN INDUCIDOS POR TFE DE Δ78Δ, UNA VARIANTE DIMÉRICA TODO-β DE IFABP.

CABANAS, I.S; ANGELANI, C.R.; CARAMELO, J.J.; DELFINO J.M.; CURTO L.M.

CABA

Jornada; Jornadas Con Ciencia; 2012

Secretaria de Extensión Universitaria y Bienestar estudiantil. F. de Farmacia y Bioquímica, UBA

Mediante proteólisis controlada de la proteína que une ácidos grasos de intestino de rata (IFABP), un modelo de barril-β, se pudieron generar variantes truncadas que preservan su estructura y función. Así, por la acción de clostripaína se obtuvo Δ98Δ1,2, y a partir de ella, Δ78Δ, un fragmento límite correspondiente al segmento 29-106 de IFABP. Δ78Δ resulta soluble, estable y forma un dímero levemente expandido que conserva la funcionalidad de la proteína original3. Por su estrecha relación con IFABP y contar con características estructurales únicas, Δ78Δ permite la exploración de los factores determinantes de la conformación y agregación. Para ello se realizaron estudios comparativos utilizando un agente perturbador como es el 2,2,2 trifluoroetanol (TFE). La formación de agregados se evaluó midiendo la turbidez a distintas concentraciones de TFE (0 – 70 % v/v) revelando un máximo de agregación a 25 %. Se examinó la naturaleza de tipo amiloide de los agregados por su unión a los colorantes Tioflavina-T y Congo Red, y mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM). La unión a colorantes muestra un perfil similar al obtenido por turbidimetría, indicando que los agregados resultantes tendrían características de tipo amiloide, conclusión apoyada por los resultados de TEM que revelan ausencia de agregación amorfa. Independientemente, datos de espectroscopía óptica (dicroismo circular y fluorescencia) dan cuenta de la modulación conformacional inducida por TFE.