IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La unión de vanadato a la Na,K-ATPasa estabiliza la forma E2 sin que la oclusión de K+ sea necesaria
Autor/es:
MONTI JLE; ROSSI RC; MONTES MR
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
La Na,K-ATPasa, al igual que otras P-ATPasas, transporta iones a expensasde la hidrólisis de ATP mediante un mecanismo que presenta intermediariosfosforilados y no fosforilados agrupados en dos estados conformacionalesprincipales E1 (con alta afinidad por Na+) y E2 (con alta afinidad por K+).El vanadato ha sido utilizado como un reconocido inhibidor de la actividadde las P-ATPasas y actualmente está siendo empleado, junto a loscomplejos metal-fluoruro, en estudios cristalográficos para representar laforma E2P. Ha sido propuesto que el MgF4(2-) y el vanadato estabilizan elestado E2 con K+ ocluido (atrapado en el interior de la proteína),conformación en la que se lograron los primeros cristales de la Na,KATPasa. Resultados de nuestro grupo sin embargo mostraron que elvanadato no desplaza totalmente el equilibrio hacia la forma E2 con K+ocluido en la H,K-ATPasa que presenta 63% de homología de secuenciacon la bomba de sodio. El presente trabajo estudia el efecto del vanadatosobre la forma E2 con y sin K+ ocluido en la Na,K-ATPasa. Evaluamos elcambio conformacional E2-E1 y la liberación de K+ desde el complejoocluido (E2K2) en presencia y ausencia de vanadato.Observamos que el inhibidor se une a la enzima para formar un complejo:E2-vanadato (k = 0.3 s-1) que ocluye Rb+ con una velocidad inicial 500veces menor que la enzima sin vanadato. Frente al agregado de Na+, elinhibidor anula la transición E2->E1 pero no impide la liberación de Rb+desde el estado ocluido (E2Rb2), proceso que ocurre a una velocidad similara la de la enzima control. Nuestros resultados sugieren que si bien elvanadato estabiliza la enzima en E2, esto no es garantía de que el K+ seencuentre ocluído.