EL TRUNCAMIENTO DE UN BARRIL B DISOCIA LA ESTABILIDAD INTRÍNSECA DE LA TENDENCIA A LA AGREGACIÓN

CURTO L.M.; ANGELANI, C.R.; CABANAS, I.S; CARAMELO, J.J.; DELFINO, J.M.

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Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

D98D es una variante abreviada y funcional de la proteína que une ácidos grasos de intestino de rata IFABP. Esta última es un barril B formado por dos hojas ortogonales de cinco hebras cada una. D98D (29-126 de IFABP) carece de la hebra BA, la mayor parte del motivo hélice-vuelta-hélice, interpuesto entre BA y BB, y de los últimos 5 aminoácidos. D98D es monomérica y conserva el core hidrofóbico compacto de IFABP. Asimismo, la existencia de una periferia laxa le confiere una estructura levemente expandida, rindiendo una construcción con menor estabilidad conformacional1,2. Por carecer del cierre del barril B, esta variante podría presentar bordes libres, no obstante no se observó tendencia a la agregación. Esta observación se contrapone a la noción de que perturbaciones de la estructura nativa generalmente conducen a especies con mayor tendencia a la agregación. En este sentido, D98D exhibe un comportamiento muy similar al de IFABP frente a la agregación inducida por trifluoroetanol (TFE). Ambas proteínas agregan máximamente a 25 % TFE, siguiendo un mecanismo simple de nucleación-elongación. La naturaleza amiloide de estos agregados fue comprobada mediante ensayos de unión a colorantes (Tioflavina-T y Congo Red) y microscopías (TEM y birrefringencia a la luz polarizada). Adicionalmente, se estudió la influencia de dicho co-solvente sobre la conformación mediante métodos espectroscópicos (dicroismo circular y fluorescencia), poniendo en evidencia la mayor flexibilidad conformacional de la variante abreviada. Se destaca la preservación del core en el comportamiento general de ambas estructuras.