Influencia del pH en la estabilidad y función del regulador de transcripción viral E2 del papilomavirus humano

ACCIALINI PAULA; DE PRAT GAY GONZALO

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XL reunion anual de la sociedad argentina de biofisica; 2011

Sociedad Argentina de Biofisica

ResumenEl papilomavirus humano infecta millones de personas en todo el mundo y es el agente causal de cáncer cervical en mujeres. La expresión de todos los genes virales está controlada por el regulador transcripcional E2. Esta proteína además reprime la expresión de las oncoproteínas E6 y E7, y la disrupción del ORF de E2 debida a la inserción en el genoma del hospedador, fue propuesta como un paso irreversible hacia la transformación celular. El dominio C-terminal de E2 (E2C) funciona como dominio de dimerización y de unión a ADN. E2C fue ampliamente estudiada en nuestro laboratorio como modelo de plegamiento proteico, en particular de plegamiento de dímeros. El reconocimiento de E2C a ADN específico implica un acoplamiento entre protonación de histidinas y dinámica de la estructura global. Las histidinas poseen un pKa cercano al pH fisiológico, de modo que pequeñas variaciones en el pH llevan a una modificación de la carga de la histidina y entonces pueden afectar la dinámica conformacional de la proteína, y por lo tanto su estabilidad y función. Con el objetivo de estudiar cómo influye el pH en la dinámica de E2C y como consecuencia en su función, se construyó una versión monomérica de E2C mediante la inserción de un adaptador entre sus dos subunidades, a la que se llamó SC (single chain).  Al estudiarse la unión de SC a ADN específico en función del pH, se observó que el ∆G varía en 0.7 Kcal/mol, mientras que para E2C lo hace en 1.1 Kcal/mol. Esto significa que en el intervalo de pH estudiado, la afinidad de SC por su sitio diana cambia muy poco. A su vez se observó que la variación de energía libre en función del pH presenta dos transiciones para de E2C, mientras que SC muestra sólo una. Por otro lado, el estudio de desplegado al equilibro en función del pH reveló que a pH 7, SC posee un valor de desnaturalización media ([D]50%) 1.1M más alto que E2C, convirtiéndose en una proteína más estable. Estos resultados muestran que la proteína SC tiene incrementada su propiedad de unión al ADN y su estabilidad con respecto a E2C, covirtiéndose en una proteína de gran interés terapéutico dada la implicancia de E2 como represor de la proliferación celular.