Efecto de la disposición espacial de las porfirinas unidas a la pared de columnas capilares sobre la interacción péptido ? ligando

ANGEL YONE; DENISE A. GRELA; ROMINA R. CARBALLO; NORA M. VIZIOLI

Santa Fe

Congreso; 6to Congreso Argentino de Química Analítica; 2011

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Durante la última década ha crecido el interés en el uso de la electrocromatografía capilar para la caracterización de péptidos y proteínas en proteómica así como también en el control de producción de proteínas recombinantes. En consecuencia, la separación, el análisis y la caracterización de este tipo de moléculas por los métodos de electromigración capilar reciben gran atención en la actualidad [1]. En el presente trabajo se modificó covalentemente la pared interna de columnas de sílica fundida con Cu(II) ? deuteroporfirina (Cu(II)-dP) y con Cu(II)?meso?tetra (carboxifenil) porfirina (Cu(II)-TCPP) [2]. Se analizaron soluciones de los péptidos sintéticos angiotensina I, bradikinina, hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH), oxitocina y metionin-encefalina. La solución de corrida consistió en fosfato de potasio 25 mM, pH 4,0, conteniendo acetonitrilo 5%, v/v, e hidroquinona 10 mM. La columna capilar fue de 35 cm de largo x 50 m de diámetro interno. Las separaciones se llevaron a cabo a 12 kV, 25°C, con detección UV a 214 nm. Se analizaron estadísticamente los valores calculados de las movilidades electroforéticas efectivas de cada péptido en las diferentes columnas y se compararon entre sí. En las columnas Cu(II)-TCPP, en las que la porfirina estaba unida a la pared por tres de sus cuatro grupos carboxilos, los péptidos bradikinina y angiotensina I mostraron una mayor interacción con la fase estacionaria que en las columnas Cu(II) ? dP (disposición perpendicular a la pared o de stacking). Este comportamiento se explicaría por la presencia de un aminoácido triptofano cercano a residuos de histidina y el marcado carácter aromático del anillo porfirínico, más expuesto en las columnas Cu(II) ? TCPP. Si bien la LHRH presenta en su estructura aminoácidos aromáticos, no cuenta con el aminoácido triptofano y posee una conformación espacial de tipo extendida, razón por la cual su interacción con el anillo porfirínico estaría más favorecida en la columna Cu(II) ? dP. De esta manera, la conformación espacial resultante de las condiciones de unión de los grupos activos a la pared de la columna sería un factor importante que afecta la interacción péptido ? ligando.