IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Oclusión de calcio en la Ca2+-ATPasa de membrana plasmática
Autor/es:
FERREIRA GOMES MS; GONZÁLEZ-LEBRERO RM; ROSSI RC; ROSSI JPFC
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
La bomba de Ca2+ de membrana plasmática (PMCA) es una proteínaintegral cuya función es transportar calcio hacia el exterior celular contra elgradiente electroquímico, impulsado por la hidrólisis de una molécula deATP por cada catión transportado. El ciclo de reacción de la PMCAinvolucra intermediarios fosforilados y transiciones conformacionales, tantoentre formas fosforiladas (E1P↔E2P) como desfosforiladas (E1↔E2). ElCa2+ se encontraría ocluido en la forma E1P luego de unirse a sitioscitoplasmáticos de la enzima y antes de ser liberado al exterior celular, queocurriría luego de la transición E1P→E2P.El objetivo de este trabajo es estudiar el mecanismo de transporte de calciode la PMCA mediante la caracterización de intermediarios con Ca2+ ocluido.Para esto desarrollamos un procedimiento que permite medir la oclusión deCa2+ en microsomas con hPMCA4b. Esto incluye un sistema desobreexpresión de la Ca2+-ATPasa y el uso de un aparato de mezcladorápido combinado con una cámara de filtrado, el cual permite elaislamiento de la enzima y la posterior cuantificación del 45Ca2+ ocluido(Caocl).Los resultados sugieren que: 1) el calcio se ocluye en el intermediario E1P;2) la oclusión de calcio y la fosforilación de la enzima son eventossimultáneos; 3) los coeficientes de velocidad de oclusión parecen no variarcon la [Ca2+] indicando que la oclusión de calcio no sería un paso limitantedel ciclo de reacción y 4) medidas de Caocl en presencia de calmodulina(CaM), activador específico de la PMCA, produce una disminución de laK0.5(Ca2+), este efecto también se observó en la mutante PMCA(ct120), lacual carece del dominio de unión a CaM y por esto, permanececontinuamente activada.Este trabajo constituye un nuevo enfoque del estudio de la PMCA quepermitirá la eventual descripción de su funcionamiento en un modelocinético y estructural detallado.