IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
SimposioTransporte a través de membranas celulares. Reactivos lipídicos fotoactivables para el análisis de transiciones conformacionales de las P-ATPasas
Autor/es:
ROSSI, JUAN PABLO FC, MANGIALAVORI, IC., FERREIRA-GOMES, MS; DALGHI, M., PIGNATARO, MF.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Simposio; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica. Buenos Aires (5-7 de diciembre).; 2011
Institución organizadora:
SAB
Resumen:
Reactivos lipídicos fotoactivables
para el análisis de transiciones conformacionales de las P-ATPasas
RESERVADO SAB
Rossi, Juan Pablo
FC, Mangialavori, IC.,
Ferreira-Gomes, MS; Dalghi, M., Pignataro, MF. IQUIFIB-Departamento de Química Biológica, Facultad de
Farmacia y Bioquímica, UBA. Junín 956, 1113, Buenos Aires, Argentina. e-mail: jprossi@qb.ffyb.uba.ar
Las proteínas de membrana constituyen más del 20% del total de proteínas, sin
embargo solo unas 300 estructuras han podido resolverse por cristalografía. Un
grupo importante de proteínas integrales de membrana son las ATPasas transportadoras de iones. Estas pertenecen a la familia de las
P-ATPasas, que comparten en común la formación de un intermediario estable en
medio ácido como parte de su ciclo de reacción. La información cristalográfica
disponible se reduce a diferentes conformaciones de la bomba de Ca2+
del retículo sarcoplásmico y a un par de estructuras de la H+-ATPasa
y de la Na,K-ATPasa.
Nuestro principal
interés ha sido obtener información estructural de la bomba de Ca2+ de
la membrana plasmática (PMCA). Esta bomba es una parte integral del mecanismo
de señales de Ca2+. Está regulada por calmodulina, que activa la
proteína mediante su unión a un sitio autoinhibitorio cambiando la conformación
de un estado inhibido a otro activado. La obtención de cristales de PMCA es
particularmente dificultosa dado que no existe una fuente natural abundante de
esta proteína, se combina con otras isoformas en el mismo tejido y es altamente
polimórfica, propiedades que complican la obtención de una muestra homogénea
adecuada para su cristalización. Este hecho nos indujo a desarrollar y emplear
diferentes técnicas para analizar proteínas como la PMCA, es decir aquellas
naturalmente escasas y en baja concentración.
La información
acerca de la estructura y el armado del dominio transmembrana de una proteína
integral puede obtenerse del análisis de las interacciones lípidoproteína.
Como veremos en este trabajo, mediante diferentes métodos y sondas hidrofóbicas
fotoactivables podemos estudiar interacciones no-covalentes entre la PMCA y los
fosfolípidos circundantes en diferentes condiciones experimentales que conducen
a conformaciones cinéticamente conocidas. Esta metodología puede aplicarse a
otras bombas y proteínas de membrana para analizar bajo un enfoque distinto su
comportamiento conformacional. Con subsidios de NIH, ANPCYT, CONICET y UBACYT.