Caracterización del efecto de la actina sobre la actividad de la Bomba de Calcio de Membrana Plasmática durante las primeras etapas de polimerización: efecto de la actina-G y oligómeros

MARIANELA G. DALGHI, MARISA M. FERNÁNDEZ, MARIELA FERREIRA-GOMES, IRENE MANGIALAVORIA Y JUAN PABLO F.C. ROSSI

Buenos Aires

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica. Buenos Aires (5-7 de diciembre).; 2011

SAB

  Caracterización del efecto de la actina sobre la actividad de la Bomba de Calcio de Membrana Plasmática durante las primeras etapas de polimerización: efecto de la actina-G y oligómeros RESERVADO SAB Marianela G. Dalghia, Marisa M. Fernándezb, Mariela Ferreira-Gomesa, Irene Mangialavoria y Juan Pablo F.C. Rossia. aIQUIFIB-Departamento de Química Biológica, FFyB, UBA. Junín 956 (1113), Buenos Aires, Argentina  bIDEHU-Cátedra de Inmunología, FFyB, UBA. Junín 956 (1113), Buenos Aires, Argentina.  mdalghi@qb.ffyb.uba.ar En nuestro laboratorio se ha demostrado que la actividad de la Bomba de Calcio de Membrana Plasmática (PMCA) puede ser regulada por el citoesqueleto de actina. Dicha regulación se efectúa a través de la interacción directa entre ambas proteínas, como se evidenció a través de resonancia plasmática de superficie (Kd 1,04 ± 0,37 µM)1. Dado que fue previamente observado que la activación máxima de la PMCA es debida a la acción de la actina G y/o cortos oligómeros, se decidió estudiar en detalle la activación durante esta etapa de la polimerización. Nuestros resultados muestran que: (1) la actina es capaz de inducir un cambio conformacional en el dominio transmembrana de la PMCA, medido a través de la accesibilidad a TID-PC2, con una Keq de 1,09 ± 0,07 µM; (2) la actividad Ca2+-ATPasa mostró un aumento de hasta cinco veces con una K0,5 para la actina de 1,73 ± 0,06 µM; (3) la actina produce un aumento de la cantidad del intermediario fosforilado con una K0,5 para la actina de 1,57 ± 0,05 µM; (4) el efecto activador es dependiente de la [Ca2+]libre, y es mayor a bajas [Ca2+]libre –inferiores a la K0,5 de la bomba por el catión; (5) en presencia de calmodulina, la actina produce una activación de la bomba mayor a la que se obtiene con cada una de ellas por separado, indicando que el efecto se produce por distintos mecanismos. En conclusión, la actina G o cortos oligómeros causan la activación Ca2+-ATPasa de la PMCA mediante la interacción directa entre ambas proteínas, y aumenta la afinidad por calcio de la bomba. 1. Dalghi, M. Tesis de maestria 2010. 2. Mangialavori, I., Ferreira-Gomes, M., Pignataro, M.F., Strehler, E.E., Rossi, J.P.F.C. (2010)  J. Biol. Chem. 285, 123-130 Con subsidios de UBACYT, CONICET y ANCYT