IQUIFIB 02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Intermediario con calcio ocluido en la Bomba de Ca2+ de membrana plasmática
Autor/es:
FERREIRA GOMES, M. S.; GONZÁLEZ-LEBRERO, R. M.; ROSSI, R. C.; ROSSI J. P. F. C.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica. Buenos Aires (5-7 de diciembre).; 2011
Institución organizadora:
SAB
Resumen:
Intermediario con calcio ocluido en la Bomba de Ca2+
de membrana plasmática
RESERVADO SAB
Ferreira
Gomes, M. S.; González-Lebrero, R. M.; Rossi, R.
C.; Rossi J. P. F. C.
IQUIFIB-Departamento
de Química Biológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA. Junín 956, 1113,
Buenos Aires, Argentina. e-mail: mariefe@qb.ffyb.uba.ar
La bomba de Ca2+ de membrana plasmática (PMCA) es
una proteína integral cuya función es transportar calcio hacia el exterior
celular contra el gradiente electroquímico, impulsado por la hidrólisis de una
molécula de ATP por cada catión transportado. El ciclo de reacción de la PMCA involucra
intermediarios fosforilados y transiciones
conformacionales, tanto entre formas fosforiladas (E1P↔E2P)
como desfosforiladas (E1↔E2). El Ca2+ se encontraría
ocluido en la forma E1P luego de unirse a sitios citoplasmáticos de
la enzima y antes de ser liberado al exterior celular, que ocurriría luego de
la transición E1P→E2P1.
El objetivo de este trabajo es estudiar el mecanismo
de transporte de calcio de la PMCA mediante la caracterización de intermediarios
con Ca2+ ocluido. Para esto desarrollamos un procedimiento que
permite medir la oclusión de Ca2+ en microsomas con hPMCA4b1. Esto incluye un sistema de
sobreexpresión de la Ca2+-ATPasa y el uso de un aparato de mezclado
rápido combinado con una cámara de filtrado2, el cual permite el
aislamiento de la enzima y la posterior cuantificación del 45Ca2+
ocluido (Caocl).
Los resultados sugieren que: 1) el calcio se ocluye en
el intermediario E1P; 2) la oclusión de calcio y la fosforilación de
la enzima son eventos simultáneos; 3) los
coeficientes de velocidad de oclusión parecen no variar con la [Ca2+]
indicando que la oclusión de calcio no sería un paso limitante del ciclo de
reacción y 4) medidas de Caocl en presencia de
calmodulina (CaM), activador específico de la PMCA, produce una disminución de
la K0.5(Ca2+), este efecto también se observó en la
mutante PMCA(ct120), la cual carece del dominio de unión a CaM y por esto, permanece
continuamente activada.
Este
trabajo constituye un nuevo enfoque del estudio de la bomba PMCA que permitirá
la eventual descripción de su funcionamiento en un modelo cinético y
estructural detallado.
1. Ferreira-Gomes,
M. S., González-Lebrero, R. M., de la Fuente, M. C., Strehler, E. E., Rossi, R. C., Rossi, J. P. (2011) J
Biol Chem. 286, 32018-32025
2. Rossi, R. C., Kaufman, S. B.,
González-Lebrero, R. M., Nørby, J. G., Garrahan, P. J. (1999). Anal. Biochem.
270, 276-285
Con
subsidios de ANPCYT, CONICET y UBACYT
