IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Eosina, una sonda fluorescente que permite detectar variaciones conformacionales de la Ca2+-ATPasa de membrana plasmática
Autor/es:
FERREIRA GOMES MS; MANGIALAVORI IC; DALGHI M; BALBI A; ROSSI RC; ROSSI JPFC
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
La bomba de Ca2+ de membrana plasmática (PMCA) es una proteínatransmembrana que transporta Ca2+ hacia el medio extracelular acoplado ala hidrólisis de ATP. Durante su funcionamiento atraviesa diferentesconformaciones que afectan regiones citoplasmáticas y segmentostransmembrana. El objetivo de este trabajo es estudiar cambiosconformacionales de la PMCA utilizando la eosina Y como sondafluorescente.La eosina Y es un potente inhibidor de la PMCA vinculado con el sitio deunión a ATP. Hemos estudiado el efecto inhibitorio de la eosina sobre labomba y evaluamos variaciones de la fluorescencia de esta sonda unida a laPMCA en diferentes condiciones experimentales que producen cambiosconformacionales.Los resultados muestran que la incorporación de PMCA al medio coneosina aumenta la fluorescencia y produce una modificación del máximo deexcitación de 527 a 534 nm y de emisión de 540 a 546 nm. El agregado deCa2+ a la bomba genera un aumento adicional de la fluorescencia. Laadición de 1 mM ATP o ADP a un medio con PMCA y eosina produce unadisminución de la fluorescencia tanto en presencia como ausencia de Ca2+.La actividad Ca2+-ATPasa en función de la concentración de eosina mostróuna inhibición hiperbólica cuya Ki aparente aumenta linealmente con laconcentración de ATP.Estos resultados sugieren que la eosina permitiría medir cambiosconformacionales de la PMCA inducidos por ATP y Ca2+ que pueden serutilizados para detectar variaciones estructurales durante el transporte deCa2+ mediante medidas de fluorescencia en tiempo real.