IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Consecuencias funcionales del procesamiento alternativo en el sitio A del transportador de Ca2+ de membrana plasmática (PMCA)
Autor/es:
CORRADI, G.R.; MAZZITELLI L.R.; ROCHI, L.; DE TEZANOS PINTO, F.; ADAMO HP
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XL Reunion anual de la Sociedad Argentina de Biofisica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofìsica
Resumen:
El transportador de Ca2+ de
membrana plasmática (PMCA) pertenece a la familia P2B de ATPasas
transportadoras de iones. La interacción directa de la calmodulina (CaM) o
lípidos ácidos con el dominio C-terminal de la PMCA causan un aumento tanto en
la Vmax como en la afinidad aparente por Ca2+ de la enzima. En
eucariotas, existen 4 genes que codifican para distintas isoformas de la
proteína (1-4) cada una de las cuales está sujeta a procesamiento alternativo
en dos sitios (A y C)1. La isoforma más abundante y ubicua es la
PMCA4. El procesamiento alternativo en el sitio A de esta isoforma, genera dos
variantes x y z que difieren solamente en la inclusión o no (respectivamente)
de los aminoácidos 301-312. En el presente trabajo, se expresaron las isoformas
h4x y h4z fusionadas a la proteína fluorescente verde (GFP)2 en Saccharomyces
cerevisiae y a partir de membranas microsomales solubilizadas con el
detergente C12E10 se obtuvo la enzima purificada mediante
cromatografía de afinidad por CaM. En ausencia de activadores la isoforma h4z
exhibió una afinidad aparente por Ca2+ ligeramente superior a la
isoforma h4x (1.00 ± 0.04 y 1.26 ± 0.08 µM respectivamente) y una Vmax 50%
mayor que la isoforma h4x sugiriendo que la variante h4z se halla parcialmente
activada. El agregado de calmodulina aumentó la Vmax (Vmax
(h4z) 4.06 ± 0.17 y Vmax (h4x) 2.34 ± 0.07 µmol Pi/mg prot/min) y disminuyó
el K0.5 para Ca2+ de ambas enzimas hasta valores
similares (K0.5 (h4z) 0.52 ± 0.04 y K0.5 (h4x) 0.50 ± 0.03 µM). Asimismo, la expresión de la
isoforma h4z permitió el rescate fenotípico de la cepa K616 en un medio
deficiente de Ca2+. Los resultados obtenidos muestran que el
procesamiento alternativo en el sitio A
de la PMCA4 genera isoformas con diferente actividad pero que conservan
la capacidad de ser activadas por CaM.
1.
Strehler, E.E. y Zacharias, D.A. (2001) Physiological
Reviews. 81 Nº1 21-50
2. Corradi and Adamo, (2007) J.
Biol. Chem.
282, 35440
Agradecimientos: Los trabajos están
siendo llevados adelante mediante subsidios ANPCyT BID 1728 OC-AR 15-25965, y
CONICET PIP 2022