“Detección de epitopes inmunodominantes mediante el uso de péptidos sintéticos “

M. DUHALDE VEGA, J.L. APARICIO, .LA. RETEGUI

Buenos Aires

Congreso; 3rd Latin Autoimmunity Congress - LACA 2010; 2010

LACA

Hemos demostrado que los ratones infectados con el virus de la hepatitis murina (MHV-A59) presentan autoanticuerpos (autoAb) dirigidos contra epitopes conformacionales y/o lineales de la enzima fumarilacetoacetatohidrolasa (FAH)  hepática. Para analizar la especificidad de estos autoAb a nivel molecular se sintetizaron por PEPSCAN  péptidos de 15 aminoácidos desplazados en un residuo, correspondientes a las secuencias N- y C-terminal (1-49 y 390-419, respectivamente) de la FAH murina, y se determinó por ELISA su reactividad frente a sueros de animales infectados con MHV. Se halló que las secuencias 9-23 y 30-44 fueron significativamente reconocidas por los autoAb, y a partir de esos datos se delimitaron los epitopes “mínimos” dentro de cada región, los que correspondieron a las secuencias 9-15 (Asp-Ser-Asp-Phe-Pro-Ile-Glu) y 36-42 (Ile-Gly-Asp-Glu-Ile-Leu-Asp). El análisis mutacional (reemplazo de cada aminoácido por Gly) de estos epitopes  demostró que los residuos 9-12 y el residuo 36 son los aminoácidos energéticamente más importantes para la unión de los autoAb. En la porción C-terminal se detectó un epitope principal (secuencia 390-409) y se determinó que el epitope mínimo posee 9 aminoácidos (fragmento 396-404). Los epitopes mínimos que hemos delimitado no se encuentran en las proteínas virales, pero su localización en la estructura terciaria de la FAH origina un epitope conformacional virtual que podría estar presente en alguna de las proteínas del virus y  desencadenar la respuesta anti-FAH.