Rol de especies reactivas del oxígeno en la acción fototóxica de una ftalocianina de Zn(II) catiónica

MARINO JULIETA; GARCÍA VIOR M. CECILIA; AWRUCH JOSEFINA ; ROGUIN LEONOR

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Reunión Científica anual de la Sociedad Argentina de Fisiología y XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental.; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Sociedad Argentina de Fisiología y Sociedad Argentina de Farmacología Experimental

Previamente identificamos un ftalocianinato de Zn(II) catiónico (Pc13) que presenta efecto fototóxico en células provenientes de un carcinoma orofaríngeo humano (KB). Este compuesto es internalizado por las células y se localiza principalmente en los lisosomas. Con el fin de investigar el mecanismo de acción antiproliferativo de esta ftalocianina, se incubaron células KB con 5 uM de Pc13 y posteriormente se irradiaron con una dosis de luz de 4,7 J cm-2 (630-700 nm). Demostramos que luego de la irradiación se produce una permeabilización parcial de la membrana lisosomal y liberación de Pc13 al citosol. Teniendo en cuenta que los tratamientos fotodinámicos pueden desencadenar procesos oxidativos, estudiamos la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) con una sonda fluorogénica. Por ensayos de microscopía de fluorescencia y citometría de flujo observamos un incremento de los niveles de ROS a los 30 minutos post-irradiación. También comprobamos que el agregado de un agente antioxidante, como el ácido ascórbico, bloquea casi por completo el efecto antiproliferativo de Pc13. Con el propósito de evaluar la inducción de un mecanismo de muerte apoptótico, determinamos la actividad de caspasas. Las células incubadas con Pc13 e irradiadas registraron un incremento de 3 veces en la actividad de las caspasas-3 y -8, y de aproximadamente 1.5 veces en la de caspasa-9 luego de 3 horas. Asimismo, observamos cambios en los niveles de expresión de proteínas de la familia Bcl-2, traslocación de Bax a las mitocondrias, modificación del potencial de membrana mitocondrial y liberación de citocromo c al citosol. Los resultados obtenidos permiten proponer que el efecto fototóxico de Pc13 es mediado por un estallido oxidativo. La permeabilización lisosomal inducida luego del tratamiento fotodinámico conduciría a la liberación de ROS, que serían responsables de desencadenar los diferentes eventos que conducen a una muerte celular por apoptosis.