Modificación de la estequiometría lípido:proteína con el estado de activación en diferentes isoformas del transportador de Ca2+ de membrana plasmática

IRENE C. MANGIALAVORI; GERARDO CORRADI; MARÍA CANDELARIA DE LA FUENTE; DÉBORA E. RINALDI; HUGO P. ADAMO ; JUAN P. F. C. ROSSI

Mar del Plata. Buenos Aires. Argentina

Congreso; LV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La bomba de Ca2+ de membrana plasmática (PMCA) transporta Ca2+ contra el gradiente electroquímico a partir de la hidrólisis de ATP. Se han identificado varias isoformas tejido específicas. La isoforma 4b es mayoritaria en eritrocitos humanos y la 2b se encuentra especialmente en tejido nervioso. La PMCA es regulada a través de un mecanismo de autoinhibición. El principal modulador de la PMCA es la calmodulina (CaM) y su unión a la bomba aumenta la actividad Ca2+-ATPasa  concomitante con el  cambio conformacional (desde E1I hacia E1A).  El mecanismo de autoinhibición de la forma 4b es más eficiente que el de la isoforma 2b, por lo que la isoforma 2b muestra mayor actividad en ausencia de CaM y mayor sensibilidad a la activación por CaM que la isoforma 4b. En este trabajo comparamos el número de lípidos en estrecho contacto con la región transmembrana (anulares) de las isoformas h4b y r2b de la PMCA sobre-expresadas y purificada de Saccharomyces cerevisiae. Para ello se incorporó un análogo fotoactivable de fosfatidilcolina ([125I]TID-PC/16) a micelas mixtas de C12E10-PC en las que se reconstituye la proteína y luego de  la fotólisis, se evaluó la incorporación específica del reactivo y se determinó la estequiometría lípido:proteína en diferentes conformaciones de ambas isoformas. La estequiometría lípido-proteína fue: 19 (ausencia de Ca2+), 29 (presencia de Ca2+) y 14 (presencia de Ca2+-CaM) y, 18 (ausencia de Ca2+), 23 (presencia de Ca2+) y 17 (presencia de Ca2+-CaM) moléculas de lípidos por molécula de proteína para la h4b y la r2b, respectivamente. La titulación del cambio conformacional muestra que la afinidad por CaM es 30 veces mayor en la isoforma r2b. Estos resultados muestran que el número de lípidos anulares varía entre isoformas de la PMCA y depende del estado de activación.