CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Hemos demostrado que la actina monomérica (G) incrementa la actividad Ca2+-ATPasa de la bomba de calcio de membrana plasmática (PMCA). La actina filamentosa (F) inhibe la actividad (Vanagas y col., 2007, de la Fuente y col, 2010). La activación por actina G es 5 veces mayor que el control en ausencia de actina. La inhibición con actina F progresa hasta anular la actividad. La relación actina/PMCA también es importante: la K0.5 para la relación actina G/PMCA fue de 135,2 ± 9,68 y la K0.5 para actina F/PMCA de 37,23 ± 8,3. Mediante cosedimentación mostramos que la actina F se uniría específicamente a la PMCA (de la Fuente y col., 2010). El objetivo del presente trabajo fue estudiar la interacción conformacional entre actina y PMCA, como también corroborar la unión de otras variantes de actina. Para ello utilizamos PMCA purificada de eritrocitos humanos, actina de músculo esquelético y actina no muscular. El cambio conformacional se determinó mediante el reactivo fotoactivable [125I]TID-PC/16. Esta sonda permite seguir cambios de la región transmembrana de PMCA (Mangialavori y col., 2009, 2010) y caracterizar los confórmeros inducidos por los moduladores. Los ensayos de cosedimentación mostraron que la isoforma no muscular de actina F se uniría específicamente a PMCA como ocurre con la variante muscular. Se marcó la PMCA con [125I]TID-PC/16 en presencia de actina G, actina F y en presencia de los activadores ácido fosfatídico y calmodulina y se determinó la incorporación específica del reactivo. Los resultados muestran que actina-G lleva a la PMCA al confórmero E1A en forma similar a los obtenidos con los activadores y a medida que la actina polimeriza la lleva al confórmero E1I en forma semejante al que se obtiene con Ca2+ solo. La actina F revierte el efecto de calmodulina y parcialmente el de ácido fosfatídico. Estos resultados son consistentes con que actina G llevaría a PMCA a una conformación activada y a medida que polimeriza a una conformación inactiva