ACCIÓN DE EXTRACTOS ETANÓLICOS DEL POLEO (LIPPIA TURBINATA GRISEB) SOBRE EL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL

JOSEFINA HIGGS; CRISTINA WASOWSKI; MARIEL MARDER

Lanus

Congreso; XXVIII Congreso Argentino de Química y 4to. Workshop de Química Medicinal; 2010

AQA

ACCIÓN DE EXTRACTOS ETANÓLICOS DEL POLEO (LIPPIA TURBINATA GRISEB) SOBRE EL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL     Josefina Higgs, Cristina Wasowski, Mariel Marder.   IQUIFIB (UBA-CONICET), Facultad de Farmacia y Bioquímica, Junín 956 (C1113AAD), Buenos Aires, Argentina. mmarder@qb.ffyb.uba.ar     Introducción: El Instituto Nacional de Estadística y Censos (INDEC) en 2007 publicó que los medicamentos de mayor facturación (362 millones de pesos) en la Argentina fueron los destinados al Sistema Nervioso Central (SNC), principalmente antidepresivos, ansiolíticos, hipnóticos y sedantes. Entre éstos se encuentran las benzodiazepinas, las cuales poseen numerosos efectos adversos entre los que se encuentran: dependencia, tolerancia, ataxia, incoordinación motora, hipotensión y paro respiratorio si se asocia con otros depresores del SNC, etc. En la actualidad existe un elevado interés en el uso de productos naturales, ya que  al poseer una actividad moderada y un amplio rango terapéutico presentan menor posibilidad de efectos secundarios y sobredosis que los fármacos de síntesis, además de ser más económicos y presentar un aval de uso etnomédico. Estos, a su vez, presentan los inconvenientes de que los principios activos son desconocidos y la falta de controles farmacológicos y toxicológicos. Trabajos realizados con distintas especies de Lippias de America del Sur, Central y África Tropical, describen una gran variedad de efectos como antivirales, antimicrobianos, repelentes de insectos, analgésicos, antipiréticos, antiinflamatorios, anticonvulsivantes, diurético, etc. También se destaca su uso como sedante y en enfermedades del Sistema Nervioso (Pascual y col., 2001). La Lippia turbinata Griseb pertenece a la familia Verbenácea, y es conocida popularmente como Poleo, Té Criollo o Té del País. Es un arbusto aromático y ramoso que crece naturalmente en varias provincias de la Argentina: Salta, Tucumán, San Luis, San Juan, Mendoza, Chaco, Córdoba, Catamarca y La Rioja donde sus partes aéreas y tallos son utilizadas en la medicina folclórica en forma de infusión como digestivo, diurético y emenagogo.   Objetivo: Determinar si los extractos etanólicos semi-purificados de la Lippia turbinata Griseb poseen efectos sobre el SNC.   Materiales y métodos: -La metodología seguida se basó en nuestra experiencia adquirida en trabajos previos realizados con plantas de uso medicinal folclórico (Marder y Paladini, 2000; Loscalzo et al., 2009). 1) extracción con solventes orgánicos (éter etílico, éter de petróleo) del residuo del extracto alcohólico evaporado de la planta utilizada; 2) purificación de los extractos más activos obtenidos por cromatografía en columnas de C18. Las fracciones obtenidas fueron estudiadas en los bioensayos de fijación específica de ligandos marcados a sus respectivos receptores presentes en el SNC; 3) purificación por HPLC en fase reversa; 4) realización de ensayos conductuales sobre ratones con fracciones parcialmente purificadas. -Inhibición de la unión de [3H]-flunitrazepam ([3H]-FNZ) al sitio de unión a benzodiazepinas (su-BDZs) en membranas sinaptosomales de corteza cerebral de rata (Wistar macho). -Animales utilizados en los ensayos conductuales: Ratones Swiss machos adultos (25-30 g), colocados en un ambiente controlado, con libre acceso a comida y agua, y bajo un ciclo de 12 hs/12 hs luz/oscuridad. Las drogas son administradas por vía i.p., 20 min antes de realizar el ensayo (vol de inyección 5 μl/g). -Ensayo del laberinto en cruz elevado (“plus-maze”): Se mide durante 5 min: Nº de entradas a ramas abiertas, Nº de entradas a ramas cerradas, tiempo en las ramas abiertas. Una droga ansiolítica aumenta los parámetros en las ramas abiertas, con respecto a los controles, sin modificar la exploración de las cerradas. Una droga ansiogénica actúa de modo inverso. -Ensayo de campo abierto con agujeros (“holeboard”): Se mide durante 5 min: el Nº de veces que el ratón introduce la cabeza en los agujeros (“head dips”), el tiempo que permanece con la cabeza introducida en ellos, y el número de veces que se levanta espontáneamente sobre sus patas traseras (“rearings”). El aumento de estos parámetros con respecto a los controles indica un efecto ansiolítico. Una droga con efectos depresores del SNC actúa de modo inverso, con una disminución de la actividad locomotora. -Ensayo de medición de la actividad locomotora: Se registra la actividad locomotora espontánea durante 5 min.   Resultados:   El siguiente diagrama muestra el esquema de purificación seguido:     Lippia turbinata (50 g) Tallos y hojas secadas a temperatura ambiente Extracción con etanol 70% 24 hs, 37ºC 1:5 (p/v)   a) Filtración b) Evaporación del alcohol c) Ensayo de unión al su-BDZ de fracciones obtenidas por HPLC analítico: una fracción con resultado +++ d) Análisis por TLC del extracto   Extracción con éter de petróleo  1:1 (v/v), una vez, se descarta el éter de petróleo Extracción con éter etílico 1:1 (v/v). dos veces     Extracto de éter etílico Fase acuosa remanente (rendimiento: 45 mg) (rendimiento: 4,5 g)     Ensayo de unión al su-BDZs: +++   Ensayo de unión al su-BDZs: -   Ensayos conductuales: Extracto de éter etílico: en las dosis de 10, 30 y 100 mg/kg, no produjo ningún efecto en los ratones en los ensayos de “holeboard” y “plus maze”. Fase acuosa remanente: esta fracción fue evaluada en las dosis de 10, 30, 100 y 300 mg/kg. En el ensayo de “holeboard” se observó un efecto depresor del SNC, evidenciado por una disminución en el Nº de “rearings” (100 y 300 mg/kg), Nº de “head dips” y tiempo “head dipping” (300 mg/kg). Se observó, además, una disminución de la actividad locomotora de los ratones en las dosis de 100 y 300 mg/kg.   Conclusiones: Los extractos etanólicos de la Lippia turbinata poseen ligandos para el su-BDZs y efectos depresores del SNC.   Referencias Bibliográficas.   Pascual, M.E., K. Slowing, E. Carretero, D. Sanchez Mata & A. Villar (2001) J.  Ethnopharmacol.76: 201-14. Wasowski, C., Marder, M., Viola, H., Medina, J.H., Paladini, A.C. (2002) Planta Med. 68, 934-37. Marder, M., Paladini, A.C. (2001). Curr. Top. Med. Chem., 2, 853-67. Loscalzo, L.M., Wasowski, C., Marder, M. (2009) Phytother. Res., 23(10), 1453-59.