NANOVESÍCULAS SUPER ESTABLES PARA MEJORAR LA BIODISPONIBILIDAD DE PROTEINAS: OPTIMIZACIÓN CON OVOALBUMINA

PRISCILA SCHILRREFF; YAMILA SIMIONI; EDER L. ROMERO; MARÍA J. MORILLA

Congreso; IV NanoCordoba 2017; 2017

A pesar del gran número de proteínas terapéuticas que se descubren cada año, la administración oral continúa siendo una barrera. Su biodisponibilidad oral es baja debido a barreras que incluyen proteasas gastrointestinales (GI), la barrera epitelial y las bombas de eflujo. Las proteínas se degradan por hidrólisis en el medio ácido en el estómago y en el tracto GI por una serie de proteasas y peptidasas (1). Una estrategia promisoria es la incorporación de estas proteínas a nanovesículas que sean estables en el tracto GI y capaces de modular su comportamiento biológico. En este contexto, los arqueosomas (ARQ), nanovesículas preparadas con arqueolípidos extraídos del microorganismo Halorubrum tebenquichense serían de gran utilidad ya que pueden proveer protección a la proteólisis durante el transito GI. Esto se debe a la resistencia de los enlaces éteres de arqueolípidos frente a la hidrólisis en un amplio rango de pH y la resistencia de la configuración sn-2,3 al ataque por fosfolipasas estero específicas (2). Por otro lado, el tamaño nanométrico y la alta carga superficial negativa de los ARQ incrementarán la mucopenetración, incrementando la chances de acceder al epitelio y su extensa captura por parte de macrófagos (3), asegurará la liberación intracelular de proteínas. Por lo tanto en este trabajo se buscó optimizar el método de preparación de los ARQ tal que se incorpore la mayor cantidad de proteína manteniendo su actividad. Se utilizó como proteína modelo ovoalbúmina (OVA). Los procedimientos utilizados para la formación de ARQ e incorporación de OVA fueron los siguientes: 1) Hidratación del film lipídico y extrusión, 2) Hidratación del film lipídico, con ciclos de congelado-descongelado y extrusión, 3) Hidratación del film lipídico, extrusión y deshidratación-rehidratación. La OVA libre no incorporada se separó por cromatografía de exclusión, centrifugación o ultracentrifugación. Previo a la cuantificación de OVA por el método del ácido bicinconínico, las muestras fueron delipidadas. La estabilidad de la estructura primaria de la proteína se evaluó por electroforesis en gel de poliacrilamida. Finalmente, se obtuvieron ARQ de tamaño nanométrico de 300 nm, pdi 0,3 y potencial Z negativo (-40 mV) mediante un método rápido y sencillo (hidratación y extrusión), evitando el uso de sonicación y por lo tanto la desnaturalización de la proteína. La OVA se incorporó en el paso previo a la deshidratación-rehidratación obteniendo una relación máxima de 200 μg/mg de proteína/fosfolipido. Actualmente se encuentra en desarrollo una formulación de ARQ con la enzima anti-oxidante superóxido dismutasa incorporada.