Arqueosomas ultradeformables como agentes terapéuticos transdermales contra células del melanocitos

HIGA LH; SCHILRREFF P; RONCAGLIA D; MORILLA MJ ; ROMERO EL

La Plata

Simposio; 1° Simposio Latinoamericano de Nanomedicinas. Segunda Escuela de Nanomedicinas; 2010

Asociación Argentina de Nanomedicina

Los Arqueosomas Ultradeformables (AUD) son liposomas unilamelares compuestos de fosfatidilcolina de soja, colato de sodio y lípidos polares totales (LPT) (3:3:1 p/p). Los LPT extraídos de la arquebacteria hiperhalofílica Halorubrum tebenquichense, a diferencia de los lípidos de bacterias y eucariotas, son dieter lípidos o arqueoles (2,3-di-O-diphytanyl-sn-glycerol) unidos a cadenas isoprenoides de 20 C. El análisis por cromatografía en capa delgada (TLC) mono- y bi-dimensional (utilizando tinciones especificas) y espectroscopia de masa por ionización electrospray (ESI-MS) (iones negativos) mostró que esta mezcla de LPT contiene arquetidil-fosfatidilglicerol (PG, m/z=805), fosfatidilglicerofosfato metil ester (PGP-Me; m/z=899), diglicosil difitanilglicerol dieter sulfatado (S-DGD-5; m/z=1055) y en menor proporción la glicocardiolipina arquetidilsulfoglicodieter esterificado con ácido fosfatídico (S-DGD-5PA; m/z=885*) y la cardiolipina arqueal bifosfatidilglicerol (BPG; m/z=760*) (*especies bicargadas) además de carotenoides retinal y bacterioruberina(1). Se ha demostrado que tras una aplicación sobre la superficie de la piel en condiciones no-oclusivas, el contenido acuoso de estos AUD penetra hasta la profundidad de la epidermis, mientras que su matriz lipídica se distribuye en el espesor de todo el estrato corneo(2). En este trabajo comparamos la capacidad de AUD cargados con la proteina modelo ovoalbumina (OVO) con la de liposomas ultradeformables convencionales (LUD -fosfatidilcolina de soja: colato de sodio, 6:1 p/p) para generar adyuvancia antigeno-dependiente luego de su aplicación trascutánea sobre el lomo de ratones BALB-c no afeitados. Adicionalmente, determinamos citotoxicidad tanto de AUD como de LUD sobre células de melanoma maligno humano (SK-MEL28) y sarcoma murino (J774), utilizando los métodos de LDH y MTT. OVO se incorporó en AUD y LUD en cuatro niveles de relacion OVO/lipidos totales por hidratación de la película lipídica y posterior extrusión y elucion por columna de exclusión molecular. Los OVO-AUD y OVO-LUD obtenidos resultaron vesículas unilamelares de 170 ± 20 nm y 220 ± 75 nm y potencial Z de -23mV,respectivamente. Luego de 4 aplicaciones (día 0, 7, 14 y 21) de OVO AUD a 0,075 - 0,15 - 0,3 y 0,6 mg OVO/ 2 cm2, la respuesta generada (IgG sérica anti OVO) fue 0,5-1 log mayor que tras la administración de OVO-LUD, alcanzando un máximo que se mantuvo entre las 3 y 7 semanas. La respuesta decayó a partir de la semana 8, aunque se observó la generación de respuesta de memoria como un aumento de 2,5 log en los títulos de IgG tras la aplicación de un boost. La respuesta obtenida tras la administración de las dosis mas bajas (0,075 y 0,15 mg OVO/2cm2) fue mas corta (semana 4 y 5) aunque la respuesta al boost fue similar. Remarcablemente, el perfil de la respuesta generada con las dosis mas altas de OVO-AUD transcutaneos fue similar a la generada tras la administración de OVO-AUD subcutáneos, aunque en esta última los títulos obtenidos fueron 1 log mayores. Los OVOLUD prácticamente no respondieron al boost. Los ensayos de citotoxicidad sobre dos líneas tumorales mostraron que en el rango de concentraciones utilizado (0,25-2 mM lípidos) los LUD no fueron tóxicos. Sin embargo, los AUD disminuyeron la viabilidad de células J774 en forma dosis dependiente (hasta un mínimo de 80% a 2mM) en tanto que la disminución de la viabilidad de SKMEL28 fue dosis independiente, a un 50%. Estos resultados indican que OVO-AUD son capaces de provocar una respuesta immune dependiente de antígeno en aplicaciones transcutáneas y citotoxicidad sobre células de melanoma. Por lo tanto, OVO-AUD podrían ser vehículos adecuados para emplear plataformas profilácticas-terapéuticas contra el melanoma maligno.