Segregación lateral de fosfatidilcolina y ácido fosfatídico en membranas reconstituidas del receptor nicotínico de acetilcolina

WENZ, JORGE JAVIER; BARRANTES, FRANCISCO JOSE

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Bio-Médicas: SAIC, SAFE, SAB (Biología), SAB (Biofísica), SAI, SAF y Sociedad Argentina de Neuroquímica (SAN); 2004

Con el objetivo de investigar la preferencia del receptor de acetilcolina nicotínico (AChR) por diferentes fases lipídicas, extractos de la proteína purificada por cromatografía de afinidad fueron reconstituidos en dos sistemas lipídicos (DPPC/DOPC y POPA/POPC), en presencia o ausencia de colesterol (Chol) y de un lípido extintor de fluorescencia (7-SLPC). Vesículas con diferentes composiciones y proporciones lipídicas, conteniendo difenilhexatrieno (DPH) y pireno-fosfatidilcolina (PyPC) como fluoróforos, fueron analizadas mediante espectroscopia de fluorescencia en función de la temperatura. La disminución de la extinción de la fluorescencia del DPH y del AChR por el 7-SLPC (comportamiento de fase similar al de un lípido insaturado) indica que el AChR promueve la segregación lateral de microdominios ordenados de DPPC (lípido saturado) en su entorno. El incremento en la anisotropía del DPH en membranas que contienen AChR, Chol o ambos, corrobora, desde otro vértice, el hallazgo anterior y sugiere, además, un efecto aditivo de ambos en la formación de un microentorno lipídico más rígido y ordenado. La notable disminución de la fluorescencia del excímero de PyPC indica una difusión restringida de la sonda en presencia del AChR. Los estudios de transferencia de energía (FRET) desde la proteína hacia el DPH indican asimismo que el AChR se localiza predominantemente en microdominios lipídicos ordenados, enriquecidos en los lípidos saturados de cada sistema (DPPC o POPA) y segregados de las fases líquidas respectivas (DOPC o POPC). Evidencias sobre una posible competencia entre Chol y POPA por iguales sitios de unión en la proteína, sugieren que la capacidad del AChR para organizar una matriz lipídica más rígida y ordenada en su microentorno no depende sólo de las cabezas polares y ácidos grasos de los fosfolípidos de membrana, sino también de interacciones específicas fosfolípido-proteína.