Estudio del rol de una adhesina de la bacteria responsable de la cancrosis de los cítricos

ZIMARO, T.; MARTIN, J; JORGELINA OTTADO; GOTTIG, N.

Rosario

Jornada; IV Jornadas de Ciencia y Tecnología- UNR; 2010

El fitopátogeno responsable de la cancrosis de los cítricos, Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), posee una adhesina no fimbrial denominada XacFhaB involucrada en la patogenicidad de la bacteria. Estudios previos en nuestro laboratorio mostraron que la expresión de XacFhaB se induce durante el desarrollo de la enfermedad y que esta adhesina media la adherencia de Xac al tejido vegetal favoreciendo la colonización y el desarrollo de la cancrosis. A su vez XacFhaB esta involucrada en la formación de biofilms estructurados de Xac, que favorecen la patogenicidad de la bacteria. En su conjunto estos resultados demuestran que las adhesinas bacterianas no fimbriales tienen un rol muy importante en la adherencia y patogenicidad de patógenos de planta. Una de las adhesinas no fimbriales mejor caracterizada es la haemaglutinina filamentosa de Bordetella pertussis (FhaBbp). En esta proteína se identificaron tres dominios funcionales: un dominio de unión a heparina (HBD) que media la unión a polisacáridos sulfatados, un dominio de reconocimiento de carbohidratos (CRD) que media la adherencia a células epiteliales respiratorias y a macrófagos y un dominio maduro carboxi-terminal (MCD) indispensable para la patogénesis de la bacteria. En este trabajo, por medio de homología a nivel de la secuencia proteica se identificó que XacFhaB posee dominios homólogos a los descriptos en FhaBbp. Con el fin de evaluar la funcionalidad de estos dominios proteicos en la adherencia bacteriana, las secuencias génicas de estos dominios se clonaron en el vector de expresión pET28a. Utilizando distintas condiciones de crecimiento, inductor y temperatura de inducción se logro obtener un buen nivel de expresión del dominio CRD. Por medio de de columnas de Ni-agarosa se logró purificar este dominio de XacFhaB. Ensayos de adherencia célula-célula y con tejido vegetal realizados in vitro indican que el dominio CRD de XacFhaB estaría involucrado en la agregación y adherencia bacteriana.