Análisis por UV-MALDI-TOF MS del lipopolisacárido de Xanthomonas axonopodis pv citri

CASABUONO, ADRIANA C.; PETROCELLI, SILVANA; OTTADO, JORGELINA; ORELLANO, ELENA G.; COUTO, ALICIA S.

Mendoza, Argentina

Simposio; XVII Simposio Nacional de Química Orgánica; 2009

SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN EN QUÍMICA ORGÁNICA

Los lipopolisacáridos (LPS) son componentes de la membrana externa debacterias Gram-negativas constituídos por un heteropolisacárido hidrofílico, quegeneralmente comprende un ¨antígeno-O¨ unido a una estructura más conservada o¨core¨ (ambos oligosacáridos) a su vez enlazada a un resto lipofílico llamado ¨LípidoA¨, el cual sirve de anclaje de estas macromoléculas a la membrana.La cancrosis de los cítricos es una enfermedad vegetal producida por labacteria Gram-negativa Xanthomonas axonopodis pv citri. Esta bacteria expresa elLPS en su superficie el cual se comporta como un patrón molecular asociado apatógenos (PAMPs) siendo reconocido por receptores transmembrana de la planta ydisparando la defensa basal en la misma. Para entender el tipo de interacción porparte de los PAMPs y los receptores en planta se construyó una mutante en el genwzt, el cual transloca el antígeno-O del citoplasma al periplasma. En este contexto seanalizó la estructura del LPS wt y del LPS wzt.Utilizando espectrometría de masas UV-MALDI-TOF MS se realizó el estudiode los LPS. Los Lípidos A y oligosacáridos liberados por hidrólisis ácida de cada unade las cepas se analizaron en modo positivo y negativo, probando diversas matrices.Se confirmó la semejanza estructural del Lípido A de ambas cepas ya que losespectros fueron coincidentes; en modo positivo presentaron principalmente dosclusters de iones a m/z 1603,9- 1534,5 y 1434,5- 1376,7 correspondientes adiglucosaminas sustituídas con un fosfato de etanolamina y un pirofosfato deetanolamina pentaciladas y tetraciladas respectivamente. En modo negativomostraron además señales a m/z 1684,3- 1588,16 por presencia de dos unidades depirofosfato de etanolamina en especies penta-acilados. A su vez cada clusterconsistió en varias señales con diferencias de masas de m/z= 14 o 16 indicandodiferente longitud en los residuos de ácidos grasos saturados y/o 3-hidroxilados.El espectro obtenido del LPS de la cepa wt en modo positivo mostróbásicamente cuatro familias de iones debido al compuesto intacto y a fragmentosprovenientes de rupturas preferenciales en la fuente (in source fragmentation). Lafamilia de iones en la zona m/z 1330-1600 se relacionan con el Lípido A, en la regionm/z 2616- 2800 se corresponden con el ¨core¨, en la zona m/z 3890-3940 seatribuyeron a especies que contendrían principalmente el Lípido A unido al ¨core¨ yen la región de masas altas a m/z 4810-4860 que difieren del grupo anterior enunidades adicionales de desoxihexosas atribuibles al antígeno-O.El oligosacárido de la cepa wt y de la mutante wzt brindaron espectros demasas en modo positivo similares. Se observaron entre otras, señales de rupturapreferencial a m/z 2792,88 y a m/z 2616,90, por posterior pérdida de una unidad deácido galacturónico, correspondiente al core. El espectro del LPS de la mutantepresentó un perfil similar de señales. Así, se confirmó que la mutante wzt tiene unLPS que carece de antígeno-O.Este trabajo constituye el primer estudio estructural por espectrometría demasas del LPS de Xanthomona axonopodi pv citri.