IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis por UV-maldi-TOF MS del lipopolisacárido de Xanthomonas axonopodis pv. citri
Autor/es:
CASABUONO, A.C., PETROCELLI, S., ORELLANO, E.G. COUTO, A.S.
Lugar:
Córdoba, Argentina
Reunión:
Congreso; Congreso de Química Orgánica SAIQO XVII SIMPOSIO NACIONAL DE QUÍMICA ORGÁNICA; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación en Química Orgánica
Resumen:
ANÁLISIS POR UV-MALDI-TOF MS DEL LIPOPOLISACÁRIDO DEXANTHOMONAS AXONOPODIS PV CITRIAdriana C. Casabuono1, Silvana Petrocelli2; Jorgelina Ottado2, Elena G.Orellano2and Alicia S.Couto11CIHIDECAR-Dpto.Q.Orgánica,FCEN-UBA;Buenos Aires, CP1428, ArgentinaE-mail:adrcas@qo.fcen.uba.ar2IBR-CONICET-UNR, Rosario, CP2000, ArgentinaLos lipopolisacáridos (LPS) son componentes de la membrana externa de bacteriasGram-negativas constituídos por un heteropolisacárido hidrofílico, que generalmentecomprende un ¨antígeno-O¨ unido a una estructura más conservada o ¨core¨ (ambosoligosacáridos) a su vez enlazada a un resto lipofílico llamado ¨Lípido A¨, el cual sirve deanclaje de estas macromoléculas a la membrana.La cancrosis de los cítricos es una enfermedad vegetal producida por la bacteria GramnegativaXanthomonas axonopodis pv citri. Esta bacteria expresa el LPS en su superficie elcual se comporta como un patrón molecular asociado a patógenos (PAMPs) siendo reconocidopor receptores transmembrana de la planta y disparando la defensa basal en la misma. Paraentender el tipo de interacción por parte de los PAMPs y los receptores en planta se construyóuna mutante en el gen wzt, el cual transloca el antígeno-O del citoplasma al periplasma. Eneste contexto se analizó la estructura del LPS wt y del LPS wzt.Utilizando espectrometría de masas UV-MALDI-TOF MS se realizó el estudio estructuralde los LPS. Los Lípidos A y oligosacáridos liberados por hidrólisis ácida de cada una de lascepas se analizaron en modo positivo y negativo, probando diversas matrices. Se confirmó lasemejanza estructural del Lípido A de ambas cepas, que en modo positivo presentaronprincipalmente dos clusters de iones a m/z 1603,9- 1534,5 y 1434,5- 1376,7 correspondientes adiglucosaminas sustituídas con un fosfato de etanolamina y un pirofosfato de etanolaminapentaciladas y tetraciladas respectivamente. En modo negativo mostraron además señales am/z 1684,3- 1588,16 por presencia de dos unidades de pirofosfato de etanolamina en especiespenta-acilados. A su vez cada cluster consistió en varias señales con diferencias de masas deΔm/z= 14 o 16 indicando diferente longitud en los residuos de ácidos grasos saturados y/o 3-hidroxilados.El espectro obtenido del LPS de la cepa wt en modo positivo mostró básicamente cuatrofamilias de iones debido al compuesto intacto y a fragmentos provenientes de rupturaspreferenciales en la fuente (in source fragmentation). La familia de iones en la zona m/z 1330-1600 se relacionan con el Lípido A, en la region m/z 2616- 2800 se corresponden con el ¨core¨,en la zona m/z 3890-3940 se atribuyeron a especies que contendrían principalmente el LípidoA unido al ¨core¨ y en la región de masas altas a m/z 4810-4860 que difieren del grupo anterioren unidades adicionales de desoxihexosas atribuibles al antígeno-O.El oligosacárido de la cepa wt y de la mutante wzt brindaron espectros de masas en modopositivo similares. Se observaron entre otras, señales de ruptura preferencial a m/z 2792,88 y am/z 2616,90, por posterior pérdida de una unidad de ácido galacturónico, correspondiente alcore. El espectro del LPS de la mutante presentó un perfil similar de señales. Así, se confirmóque la mutante wzt tiene un LPS que carece de antígeno-O.Este trabajo constituye el primer estudio estructural del LPS de Xanthomona axonopodipv citri.