Análisis de la expresión y regulación de proteínas de adhesión celular durante los procesos de carcinogéncesis asociados a infecciones por Papiloma virus humanos.

BUGNON VALDANO MARINA; FACCIUTO FLORENCIA; PANCERA BELÉN; NOCITO ANA LÍA; CAVATORTA ANA LAURA; GARDIOL DANIELA

Concordia-Entre Ríos

Congreso; XVII Jornadas de Jóvenes Investigadores de AUGM; 2009

Asociación de Universidades Grupo Montevideo -

ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DE PROTEÍNAS DE ADHESIÓN CELULAR DURANTE LOS PROCESOS DE CARCINOGÉNESIS ASOCIADOS A INFECCIONES POR PAPILOMA VIRUS HUMANOS Bugnon Valdano Marina1, Facciuto Florencia1, Pancera Belén2, Nocito Ana Lía2, Cavatorta Ana Laura1 y Gardiol Daniela1. 1 Área Virología. IBR/CONICET. Fac. Cs. Bioquímicas y Farmacéuticas. UNR. 2 Cátedra de Anatomía y Fisiología Patológicas. Fac. Cs. Médicas. UNR. mbougnonvaldano@yahoo.com.ar. Las proteínas E6 derivadas de papilomavirus humanos (HPV) de alto riesgo se unen al oncosupresor Disc Large (Dlg) y estimulan su degradación por el mecanismo proteolítico dependiente de ubiquitina. Dlg es una proteína que participa en la formación de las uniones intercelulares, en el control de la polaridad y proliferación celular y en el mantenimiento de la arquitectura de los tejidos. Demostramos que la expresión de Dlg se encuentra notablemente disminuida en carcinomas cervicales asociados a HPV, así como en otros tumores como adenocarcinoma de colon. Estas y otras evidencias han sugerido un rol importante para Dlg en los mecanismos de supresión oncogénica. Sin embargo, los mecanismos por los cuales se controla la transcripción de Dlg, y que podrían contribuir a los patrones de expresión de Dlg observados en biopsias, no eran conocidos hasta el momento. Por ello nos propusimos analizar dichos mecanismos regulatorios. En este sentido, hemos reportado el clonado y análisis funcional de la región promotora de Dlg. De manera interesante demostramos que factores de transcripción de la familia Snail se unen directamente al promotor de Dlg reprimiendo su actividad transcripcional. Estos factores inhiben la expresión de marcadores epiteliales como caderina, están sobre-expresados en una variedad de tumores, y participan en el proceso de transición epitelio-mesénquima durante la progresión carcinogénica, sugiriendo un mecanismo de regulación coordinada de varias proteínas que intervienen en las uniones intercelulares. Para investigar la relevancia de la regulación de la expresión de Dlg por Snail, estamos evaluando los patrones de expresión de ambas proteínas en muestras histológicas archivadas derivadas de lesiones neoplásicas de distinto grado de severidad asociadas a HPV. Para ello hemos optimizado un protocolo de inmunohistoquímica (IHC) para Snail ensayando distintas metodologías y tomando como punto de partida técnicas previamente optimizadas en nuestro laboratorio. Hemos verificado la especificidad del sistema mediante el uso del “bloqueo antigénico” a través de la incubación de los anticuerpos anti-Snail con el correspondiente antigéno: proteína Snail recombinante. Los resultados de los ensayos de IHC usando biopsias están siendo evaluados. Asimismo, análisis por bioinformática demostraron la presencia de sitios consenso de unión a otros factores transcripcionales. Entre ellos, nos hemos focalizado en el factor Sp-1 (stimulating protein), dado que se han encontrado varios sitios de unión para este regulador y además, Sp-1 es capaz de regular promotores ricos en GC como es el caso del promotor de Dlg. En primer lugar, y con el objetivo de analizar su función sobre la actividad transcripcional del promotor de Dlg, hemos clonado las secuencias que codifican para Sp-1 en un vector de expresión. La eficiencia de dicho constructo fue evaluada mediante técnicas de inmunodetección usando la línea celular 293. En general, estos estudios son los primeros en analizar la actividad y regulación transcripcional del gen Dlg y contribuyen al entendimiento de las variaciones de sus niveles en las lesiones asociadas a HPV y en otros tumores.